RESUMO

Agrobacterium tumefaciens é o agente causal da galha-da-coroa, doença que afeta a maioria das plantas dicotiledôneas e caracteriza-se pelo crescimento de tumores na junção entre o caule e a raiz (coroa). A formação desses tumores é o resultado de um processo natural de transferência de genes de Agrobacterium spp. para o genoma da planta infetada. Esses genes estão contidos em um plasmídio de alto peso molecular (120 a 250 kb), denominado Ti ("tumor inducing"), presente em todas as linhagens patogênicas de Agrobacterium spp. Duas regiões do plasmídio Ti estão diretamente envolvidas na indução do tumor: a região-T, que corresponde ao segmento de DNA transferido para a célula vegetal, e a região de virulência (região vir), que contém genes envolvidos na síntese de proteínas responsáveis pelo processo de transferência da região-T. Esta região, uma vez transferida e integrada no genoma da célula vegetal, passa a ser denominada de T-DNA ("transferred DNA"). Os genes presentes no T-DNA codificam enzimas envolvidas na via de biossíntese de reguladores de crescimento, auxinas e citocininas. A síntese desses reguladores pelas células transformadas causa um desbalanço hormonal, levando à formação do tumor no local da infecção. Outro grupo de genes presentes no T-DNA codifica enzimas responsáveis pela síntese de opinas, que são catabolisadas especificamente pela bactéria colonizadora, como fonte de nutrientes. O conhecimento preliminar das bases moleculares envolvidas no processo de infecção de uma planta hospedeira por Agrobacterium spp., permitiu a utilização desta bactéria como vetor natural de transformação genética de plantas.

O presente trabalho objetivou o estabelecimento de protocolos de desinfestação e germinação de sementes, bem como a indução da multibrotação in vitro da farinha-seca (Albizia niopoides) utilizando sementes e segmentos nodais de plântulas germinadas in vitro. Para avaliar a desinfestação e a germinação, foram testados os tempos de 0, 10, 20 e 30 minutos de imersão das sementes no hipoclorito de sódio a 8%. As avaliações das contaminações por fungos e/ou bactérias, assim como a germinação de sementes foram realizadas 20 dias após o início do teste. A indução da multibrotação foi realizada em meio de cultura WPM, suplementado com BAP, nas concentrações de 0,0; 0,5; 2,5 e 5,0 μM combinados com ANA na concentração de 0,5 μM. Avaliou-se o número de brotos e formação de calo. O teste F, não revelou diferença significativa, nas porcentagens de desinfestação e germinação, quanto ao tempo de imersão no hipoclorito de sódio. A porcentagem de desinfestação variou entre 93% a 97% e a de germinação de 67% a 73%. A maior taxa de regeneração de brotos axilares (2,6) foi obtida com a combinação de 5,0 μM de BAP + 0,5 μM de ANA, 30 dias após a inoculação. Observou-se também que sem a adição de reguladores de crescimento no meio WPM, plântulas de farinha-seca obtiveram significativas taxas de brotações (2,3 brotos)

A procedure for genetic transformation of the hybrid Eucalyptus grandis × E. urophylla using particle bombardment is described. Cotyledon- and hypocotyl-derived calli growing on SP medium supplemented with 2�m�thidiazuron or on MS modified (MSM) medium supplemented with 10 m 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and 2.5�m�6-benzylaminopurine (BAP), were used as target material for bombardment assays. Multiple preincubation and bombardment conditions were tested. Tungsten particles were coated with the plasmid pBI426 harbouring a β-glucuronidase (gus) and neomycin phosphotransferase II (npt II) gene fusion controlled by a double 35S cauliflower mosaic virus (CaMV) promoter. Four days after bombardment, the transient transformation efficiency was determined by expression of the gus gene. Fully GUS-positive calli were then obtained after 105 d in MSM medium supplemented with 2,4-D, BAP, and the selective agent kanamycin at 200 mg L-1. The presence of the gus gene in these kanamycin-resistant calli was confirmed by polymerase chain reaction analysis. Extensive experiments were performed aiming to identify conditions for the regeneration of these GUS-expressing calli. However, they were unable to regenerate transgenic shoots, suggesting that conditions suitable for regeneration are unsuitable for transformation and vice versa.