A infecção do trato urinário (ITU) é considerada uma das doenças mais comuns de origem bacteriana. Objetivou-se determinar a prevalência de ITU em pacientes atendidos no Hospital Universitário de Santa Maria, o agente mais isolado, a incidência entre os sexos e a faixa etária mais acometida. Realizou-se um estudo retrospectivo das uroculturas solicitadas no HUSM, no período de 2007 à 2010, as quais foram cultivadas no setor de Microbiologia do Laboratório de Análises Clínicas. Dos 34.898 exames solicitados, 6.190 (17,74%) foram positivos. O sexo feminino apresentou o maior percentual de positividade (72,94%) e a faixa etária feminina mais acometida foi entre 14 a 40 anos (37,6%) e a masculina entre 41 a 64 anos (10,6%). O microrganismo prevalente foi a Escherichia coli com 31,9%. A partir deste estudo pôde-se verificar que os bacilos gram-negativos (BGN) foram os patógenos prevalentes, além disso, ocorreu um significativo número de isolados de Candida sp.