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2013. A Poliendocrinopatia Autoimune Associada a Candidiase e Distrofia ectodérmica é uma doença que apresenta auto-anticorpos e susceptibilidade a Candida albicans. Ainda que a autoimunidade possa ser explicada por defeitos no desenvolvimento dos linfócitos no timo, a suscetibilidade a candidíase não foi totalmente esclarecida. Recentemente, nosso grupo observou que a proteína AIRE é necessária para a via de sinalização da Dectina-1, importante para a resposta frente a C. albicans. No presente projeto, investigamos como a ausência de AIRE influencia em eventos específicos para o reconhecimento e eliminação do patógeno via receptor Dectina-1. Assim, avaliamos a produção de derivados reativos do oxigênio, a expressão de moléculas do sistema NADPH oxidase e a fagocitose por células de paciente com APECED ou células THP-1 silenciadas para AIRE. Observamos que não houve diferença estatística significativa no "burst oxidativo" e na expressão dos componentes do sistema NADPH oxidase por estas células. Estes resultados sugerem que AIRE não tem influência nos componentes do sistema NADPH oxidase. Analisamos a fagocitose e encontramos que as células THP-1 silenciadas para AIRE fagocitam menos que as células THP-1 wild-type, o que indica que há um defeito no reconhecimento do patógeno. Desta forma, decidimos incluir pacientes com APECED no trabalho para confirmar os dados obtidos com as células THP-1. Por esta doença ser rara, até o momento recrutamos um paciente para análise. Analisamos a expressão de moléculas do sistema NADPH nas células do paciente com APECED. Verificamos que não há diferença na expressão flavocitocromo b 558 e p40phox entre as células do paciente com APECED e controle sadio. Em paralelo, analisamos o "burst oxidativo" utilizando a técnica de dosagem de dihidro-rodamina. As populações CD14 positiva e CD14 negativa do paciente com APECED apresentaram uma diminuição no "burst oxidativo" quando estimuladas com PMA, Curdlan e Zymosan depletado por 1 h quando comparado ao controle sadio. Além disso, observamos que os PBMCs do paciente com APECED fagocitam 33% menos C. albicans comparado ao controle. Os resultados encontrados sugerem que há um defeito no reconhecimento do patógeno via Dectina-1, gerando uma diminuição da fagocitose de C. albicans que pode dificultar sua eliminação. Desta forma, este estudo pretendeu contribuir para melhor compreender os mecanismos pelos quais pacientes com APECED são susceptíveis a C. albicans. Palavras-chave: AIRE. APECED. Dectina-1. Fagocitose. Burst oxidativo. Candida albicans.

Efeito do BAY 41-2272 em Linfócitos T HumanosTese apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, para obtenção do Título de Doutor em Ciências. São Paulo 2018 RESUMO Carvalho MUWB. Efeito do BAY 41-2272 em linfócitos T humanos. [tese (Doutorado em Imunologia)]. São Paulo: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo; 2017. No presente trabalho avaliamos o potencial do BAY 41-2272 e sua via, como uma ferramenta para modulação da função dos linfócitos. Para isso, realizamos tratamentos farmacológicos com BAY 41-2272, avaliando a produção de citocinas e observamos que este fármaco, como ativador direto, não induz produção de IFNγ, IL-4 e IL-10 nos linfócitos. No entanto, o prétratamento por 24 horas com BAY 41-2272, com posterior ativação com PMA, mostrou que esta droga tem efeito inibitório na produção das citocinas. Em vista disto, avaliamos se este fármaco seria capaz de ativar estas células através da expressão de CD69. Vimos que por si só esta droga não foi capaz de aumentar a expressão de CD69, no entanto o pré-tratamento com BAY 41-2272 inibiu a ativação dos linfócitos T CD4. Assim, avaliamos se o fármaco seria capaz de inibir a expressão de fatores de transcrição FOXP3, RORγT, Tbet e GATA3. Vimos que o BAY 41-2272 não induziu expressão desses fatores de transcrição e o pré-tratamento com este fármaco não alterou a expressão de FOXP3, RORγT e GATA3, mas inibiu a expressão de Tbet quando comparado ao estimulado com PMA e Ionomicina sem o prétratamento. Observamos também que o pré-tratamento com BAY 41-2272 inibiu a linfoproliferação. Estes resultados sugerem que o BAY 41-2272 e sua via, têm um perfil inibitório sobre os linfócitos T CD4, e potencialmente podem ser utilizados como imunomodulador em pacientes com comprometimento do sistema imunológico e síndromes linfoproliferativas. Palavras-chave: BAY 41-2272, linfócitos, guanilato ciclase solúvel ABSTRACT Carvalho MUWB. Effect of BAY 41-2272 in human T lymphocytes. [tese (Doutorado em Imunologia)]. São Paulo: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo; 2017.In this work, we evaluated the potential of BAY 41-2272 and its pathway as a tool for modulating lymphocyte function. For this, we performed pharmacological treatments with BAY 41-2272, evaluating the production of cytokines and observed that this drug, as a direct activator, does not induce production of IFNγ, IL-4 e IL-10. However, pre-treatment for 24 hours with BAY 41-2272 and subsequente activation with PMA showed that this drug has an inhibitory effect on cytokine production. Thus, we evaluated if this drug would be able to activate these cells through the CD69 expression. We saw that alone, BAY 41-2272 was not able to increase CD69 expression, however, pre-treatment inhibited activation of CD4 T lymphocytes. Then, we evaluated if this chemical compound would be able to inhibite the expression of transcription factors FOXP3, RORγT, Tbet and GATA3. We have seen that BAY 41-2272 did not induce expr...