In search for a cheap and effective transfection reagent we used the positively charged polyplexforming compound polyethylenimine (PEI). This compound is commercially available from different companies either as a non-modified chemical reagent or with additives as a more cost intensive transfection reagent. Here we used the non-modified PEI reagent to optimize transfection protocols for different cell-lines. With these optimized conditions we were able to transiently transfect a number of cell-lines up to 40 -90%.

Neonates and infants are more vulnerable to infections and show reduced responses to vaccination. Consequently, repeated immunizations are required to induce protection and early life vaccines against major pathogens such as influenza are yet unavailable. Formulating antigens with potent adjuvants, including immunostimulators and delivery systems, is a demonstrated approach to enhance vaccine efficacy. Yet, adjuvants effective in adults may not meet the specific requirements for activating the early life immune system. Here, we assessed the neonatal adjuvanticity of three novel adjuvants including TLR4 (glucopyranosyl lipid adjuvant-squalene emulsion), TLR9 (IC31®), and Mincle (CAF01) agonists, which all induce germinal centers (GCs) and potent antibody responses to influenza hemagglutinin (HA) in adult mice. In neonates, a single dose of HA formulated into each adjuvant induced T follicular helper (TFH) cells. However, only HA/CAF01 elicited significantly higher and sustained antibody responses, engaging neonatal B cells to differentiate into GCs already after a single dose. Although antibody titers remained lower than in adults, HA-specific responses induced by a single neonatal dose of HA/CAF01 were sufficient to confer protection against influenza viral challenge. Postulating that the neonatal adjuvanticity of CAF01 may result from the functionality of the C-type lectin receptor (CLR) Mincle in early life we asked whether other C-type lectin agonists would show a similar neonatal adjuvanticity. Replacing the Mincle agonist trehalose 6,6′-dibehenate by Curdlan, which binds to Dectin-1, enhanced antibody responses through the induction of similar levels of TFH, GCs and bone marrow high-affinity plasma cells. Thus, specific requirements of early life B cells may already be met after a single vaccine dose using CLR-activating agonists, identified here as promising B cell immunostimulators for early life vaccines when included into cationic liposomes.

Patients with systemic lupus erythematosus (SLE) often develop a wide variety of serological manifestations including the presence of antibodies to double-stranded DNA (anti-dsDNA). Positivity for anti-dsDNA constitutes one of the laboratory criteria for the diagnosis of SLE and is therefore clinically relevant. We analyzed the diagnostic accuracies of four commercial anti-dsDNA immunoassays and compared the results with a recently established surface plasmon resonance (SPR) biosensor chip with covalently chip-immobilized dsDNA. The anti-dsDNA measurements were performed retrospectively in 50 patients with clinically proven SLE, 39 patients with other autoimmunopathies and 20 healthy controls. Data were evaluated by Receiver-Operator Characteristic (ROC) analysis, with special regard to SLE patients suffering from lupus nephritis. The ROC analyses for the four immunoassays and the SPR biosensor resulted in the following area-under-the-curve (AUC) and diagnostic efficiency (DE) values in descending order: Bindazyme AUC, 0.89; DE, 0.88; ELiA AUC, 0.89; DE, 0.86; SPR biosensor AUC, 0.82; DE, 0.80; Farrzyme AUC, 0.77; DE, 0.77; Farr AUC, 0.77; DE, 0.70. When considering the 22 nephritis SLE patients the following AUC were observed: Bindazyme 0.98; EliA 0.95; SPR biosensor 0.93; Farr 0.89; Farrzyme 0.88. Although various methodologies for the determination of anti-dsDNA were compared, the overall diagnostic accuracy was found satisfactory in all immunoassays. Best data were found for the Bindazyme assay. We referenced the measurements to our in-house SPR biosensor device which showed good AUC and DE values. When optimized, this technique, allowing to monitor antigen/ antibody interactions in real-time, may add a new analytical quality to the existing methods, potentially beneficial in diagnosis and clinical monitoring of SLE.

ZusammenfassungAn 11 Patienten mit akuter Hepatitis, einem mit chronischer Hepatitis und 7 Gesunden wurden 3 bis 4 Wochen dauernde Untersuchungen des Eisenstoffwechsels und des Blutauf- und -abbaues vorgenommen. Dazu wurden autologes Serum mit 59Fe und autologe Erythrozyten mit 51Cr markiert und den Versuchspersonen reinjiziert. Neben der Bestimmung des gesamten peripheren Blutbildes, des Blutvolumens, des Serumeisens und der latenten und totalen Eisenbindungskapazität wurde die Verteilung des injizierten Radioeisens in die Organe Kreuzbein, Leber, Milz und Blut von der Körperoberfläche aus verfolgt, seine Abwanderungsgeschwindigkeit aus der Blutbahn und sein Einbau in die Erythrozyten gemessen und die Halbwertzeit der 51Cr-markierten Erythrozyten bestimmt. Außerdem wurde der Plasmaeisenumsatz berechnet. Aus dem Vergleich der Untersuchungsbefunde der Gesunden und Kranken wurden folgende Ergebnisse gewonnen:1. Der Serumeisenspiegel der Kranken ist erhöht.2. Bei Hepatitis ist die ungesättigte Eisenbindungskapazität des Serums stark vermindert, während die totale Eisenbindungskapazität etwa ebenso groß ist wie bei Gesunden.3. Bei den untersuchten akuten Hepatitiden wandert das injizierte Radioeisen ebenso schnell aus der Blutbahn ab wie bei den Gesunden.4. Die in der Zeiteinheit im Plasma umgesetzte Eisenmenge ist bei den untersuchten Kranken im Mittel doppelt so groß wie bei der untersuchten Kontrollgruppe.5. Die Erythrozytenlebenszeit der Hepatitiskranken ist verkürzt, gleichzeitig ist die Tätigkeit des blutbildenden Gewebes bei Hepatitis gesteigert, so daß es nicht zum Manifestwerden einer Anämie kommt.6. Während der akuten Phase der Erkrankung kommt es zu einer Einlagerung von Eisen in die Leber.Es wird über die Steigerung des Plasmaeisenumsatzes bei Hepatitis mit folgendem Ergebnis diskutiert:1. Bei dem gesteigerten Blutzerfall und seiner Kompensation durch Mehrarbeit des erythropoetischen Systems wird in der Zeiteinheit über die Erythrozyten und über das Knochenmark mehr Eisen umgesetzt als beim Gesunden.2. Aus Berichten anderer Autoren wird zitiert, daß in der akuten Phase der Erkrankung Ferritineisen aus der geschädigten Leber in der Blutbahn erscheint, Die eigenen Ergebnisse zeigen eine Eiseneinlagerung in die Leber.Es wird der Schluß gezogen, daß die gegenüber Gesunden verstärkten Eisenumsetzungen über die Erythrozyten und über das Knochenmark sowie der Eisenaustausch zwischen Leber und Plasma den vermehrten Umsatz des Transporteisens verursachen.Daneben wird auf Probleme hingewiesen, die durch das im Plasma der Hepatitiskranken erscheinende Ferritin aufgeworfen werden. Dabei wird betont, daß sichere Aussagen über die Eisenbindungsfähigkeit des Serums und über die Eisenumsetzungen bei Hepatitis erst möglich sind, wenn das Verhalten des Ferritins in der Blutbahn erforscht ist und quantitative Ferritinbestimmungen vorgenommen worden sind.

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