Микоплазмы и уреаплазмы-важные этиологические агенты маститов, пневмоний и репродуктивных нарушений у крупного рогатого скота (КРС), которые наносят значительный экономический ущерб хозяйствам. К наиболее распространенным клинически значимым видам относятся Mycoplasma bovis, M. bovigenitalium, M. californicum и Ureaplasma diversum. Существующие диагностические наборы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяют с высокой точностью выявлять в биологическом материале бактерии рода Mycoplasma, но не проводить видовую идентификацию. В представленной работе с помощью разработанных методик на основе ПЦР мы впервые выявили и дифференцировали патогенные виды семейства Mycoplasmataceae в образцах криоконсервированной спермы быков-производителей, используемой для искусственного осеменения в отечественных хозяйствах. Нашей целью была разработка методик для идентификации и дифференциации наиболее распространенных патогенных микоплазм (Mycoplasma bovis, M. californicum, M. bovigenitalium) и Ureaplasma diversum на основе ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. В качестве мишеней для ПЦР были выбраны гены UvrC для M. bovis, 16S рРНК для M. bovigenitalium и U. diversum, ген rpoB для M. californicum. В методики включили систему праймеров и зондов для детекции амплификации экзогенного неконкурентного внутреннего контрольного образца (ВКО). Специфичность разработанных методик проверяли на панели образцов, содержащей вирусные и бактериальные патогены, которые вызывают заболевания у крупного рогатого скота, а также геномную ДНК коровы. Для оценки чувствительности каждой методики были разработаны положительные контрольные образцы на основе генно-инженерных конструкций, содержащих участок соответствующей специфической ДНК. Аналитическую чувствительность оценивали отдельно для каждого патогена, для чего исследовали 10-кратные разведения соответствующих контрольных образцов в отрицательных пробах биологического материала (сперма, молоко, влагалищные смывы, внутренние органы). Для разных видов материала аналитическая чувствительность составила в среднем 5½10 3 копий/мл. Эффективность амплификации для M. bovis составила 99 %, для M. bovigenitalium-87 %, для M. californicum-94 %, для U. diversum-98 %. С помощью разработанных методик были исследованы 410 образцов спермы быков для искусственного осеменения из отечественных и зарубежных племенных центров. ДНК M. bovis была обнаружена в 2,5 % образцов из зарубежных племенных центров. В образцах спермы из отечественных хозяйств ДНК M. bovis не выявили. Положительный результат обнаружения ДНК M. bovigenitalium был получен для 60,7 % отечественных и для 25,1 % импортных образцов спермы, ДНК M. californicum обнаружили соответственно в 51,7 % и 25,1 % образцов. ДНК Ureaplasma diversum-в 55 % образцов спермы быков из российских племенных центров и в 12,1 % образцов спермы иностранного происхождения. Коинфицирование M. californicum/M. bovigenitalium выявили в 97 образцах (23,7 %), M. bovigenitalium/U. diversum-в 86 случаях (21 %). Одновременное инфицирование...

No abstract

The results of the study of bull's semen used for artificial insemination are presented in the article. 217 samples of frozen semen from bulls of Russian and international origin were analyzed by PCR assays for genetic material of Neospora caninum, Bovine Herpesvirus types 1 and 4, Bovine viral diarrhea virus, Bovine leukemia virus, Schmallenberg virus, Lumpy skin disease virus, Mycoplasma spp., Brucella spp., Chlamydia spp., Campylobacter spp., Leptospira spp. and Histophilus somni. The results showed presence of Bovine Herpesvirus type 1 and Bovine Herpesvirus type 4 (0.92% semen samples) and high frequency of Histophillus somni, Campylobacter spp. and Mycoplasma spp. in artificially prepared semen that is used for artificial insemination. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА Полимеразная цепная реакция, сперма КРС, искусственное осеменение, идентификация возбудителей.

Микоплазмы и уреаплазмы-важные этиологические агенты маститов, пневмоний и репродуктивных нарушений у крупного рогатого скота (КРС), которые наносят значительный экономический ущерб хозяйствам. К наиболее распространенным клинически значимым видам относятся Mycoplasma bovis, M. bovigenitalium, M. californicum и Ureaplasma diversum. Существующие диагностические наборы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяют с высокой точностью выявлять в биологическом материале бактерии рода Mycoplasma, но не проводить видовую идентификацию. В представленной работе с помощью разработанных методик на основе ПЦР мы впервые выявили и дифференцировали патогенные виды семейства Mycoplasmataceae в образцах криоконсервированной спермы быков-производителей, используемой для искусственного осеменения в отечественных хозяйствах. Нашей целью была разработка методик для идентификации и дифференциации наиболее распространенных патогенных микоплазм (Mycoplasma bovis, M. californicum, M. bovigenitalium) и Ureaplasma diversum на основе ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. В качестве мишеней для ПЦР были выбраны гены UvrC для M. bovis, 16S рРНК для M. bovigenitalium и U. diversum, ген rpoB для M. californicum. В методики включили систему праймеров и зондов для детекции амплификации экзогенного неконкурентного внутреннего контрольного образца (ВКО). Специфичность разработанных методик проверяли на панели образцов, содержащей вирусные и бактериальные патогены, которые вызывают заболевания у крупного рогатого скота, а также геномную ДНК коровы. Для оценки чувствительности каждой методики были разработаны положительные контрольные образцы на основе генно-инженерных конструкций, содержащих участок соответствующей специфической ДНК. Аналитическую чувствительность оценивали отдельно для каждого патогена, для чего исследовали 10-кратные разведения соответствующих контрольных образцов в отрицательных пробах биологического материала (сперма, молоко, влагалищные смывы, внутренние органы). Для разных видов материала аналитическая чувствительность составила в среднем 5½10 3 копий/мл. Эффективность амплификации для M. bovis составила 99 %, для M. bovigenitalium-87 %, для M. californicum-94 %, для U. diversum-98 %. С помощью разработанных методик были исследованы 410 образцов спермы быков для искусственного осеменения из отечественных и зарубежных племенных центров. ДНК M. bovis была обнаружена в 2,5 % образцов из зарубежных племенных центров. В образцах спермы из отечественных хозяйств ДНК M. bovis не выявили. Положительный результат обнаружения ДНК M. bovigenitalium был получен для 60,7 % отечественных и для 25,1 % импортных образцов спермы, ДНК M. californicum обнаружили соответственно в 51,7 % и 25,1 % образцов. ДНК Ureaplasma diversum-в 55 % образцов спермы быков из российских племенных центров и в 12,1 % образцов спермы иностранного происхождения. Коинфицирование M. californicum/M. bovigenitalium выявили в 97 образцах (23,7 %), M. bovigenitalium/U. diversum-в 86 случаях (21 %). Одновременное инфицирование...

Определение типа Cl.perfringens является важной задачей для изучения развития эпизоотологического процесса и необходимым критерием отбора штаммов для разработки эффективных вакцин. Идентификация токсинов является трудоёмкой, дорогостоящей и достаточно длительной процедурой, к тому же не всегда позволяющей получить точные результаты. Нами показана возможность типирования Cl.perfringens молекулярно-биологическими методами. Для подтверждения чувствительности и специфичности метода была проведена идентификация штаммов Clostridium spp., а также проведено ПЦР-исследование изолятов, выделенных из патологического материала при клостридиозных инфекциях КРС в 2016 году. ABSTRACT Cl.perfringens characterization is very important for studying the epizootic process and necessary for selecting strains for the effective vaccines. Toxins identification by neutralization reaction is time-consuming, expensive and long-term research, sometimes without accurate results. Molecular typing of Cl.perfringens strains was made on collections of microorganisms with high sensitivity and specificity. Cultures of Clostridium spp. isolated from pathological material in 2016 were studied by PCR method as well. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА Clostridium perfringens, определение токсинов, полимеразная цепная реакция, штаммы.