The article reviews the scientific papars on the structure, function and biological role of von Willebrand factor (vWF). The vWF mainly was considered as the main factor in the development of bleeding disorders (von Willebrand’s disease). On the other hand, it can be able the cause thrombotic complications through to the functional ability of the factor to stimulate platelet adhesion. The aim of this work was to conduct an analysis of the structure of the factor, its role in the process of hemostasis to determine a border between two opposing processes. Von Willebrand factor is a hemostatic, multimeric glycoprotein, one of the key components of the hemostasis system, taking an active part at startup mechanisms of platelet adhesion at the site of vesselendothelial damage. On the other hand, another important function of vWF is co-factor activity related to coagulation factor VIII (FVIII), which is to stabilize its activity, promoting thrombin activation and preventing the cleavage of the molecule by blood plasma proteinases. The human gene of vWF is localized on the short arm of the 12 chromosome, contains 52 exons and covers approximately 180 kb. VWF is made by endothelial cells and by bone marrow megakaryocytes. The factor is preserved in the Weibel-Palade bodies of endotolial cells and α-granules of platelets. The primary pro-polypeptide consists of 2813 amino acid, of which 2050 form the mature peptide. The molecular weight of vWF is 220 kDa. In bloodstreamv WF circulates as a multimeric protein with a molecular weight from 400 to 20,000 kDa. The synthesized molecule has the next domain structure: D1-D2-D’-D3-A1-A2-A3-D4-C1-C2-C3-C4-C5-C6-CK. Domains are responsible for binding various proteins, including FVIII, fibrin, collagen, heparin, complement components etcetra. Von Willebrand disease (vWD) is the most common autosomal inherited disorder of the hemostasis system (from 0.6 to 2.0% of the population) and the cause is a genetic deficiency of quantitative and/or qualitative abnormal multimeric structure of the vWF molecule. There are three main subtypes of vWD. Quite often in such patients there is a decrease in FVIII activity, as an indirect consequence of changes in vWF. The basic principle of vWD treatment is based on the normalization of vWF and/or FVIII levels by increasing the level of external vWF under the action of desmopressin or the introduction of factor concentrates. In contrast to hereditary vWD, acquired von Willebrand syndrome is a relatively rare acquired bleeding of the blood coagulation system (incidence from 0.04 to 0.13 %) associated with various underlying diseases. For today a significant amount of research devoted to the relationship between vWF and thrombotic complications, that is due functional ability of the factor stimulate platelet adhesion. In particular, there are reports of the following complications in: pneumonia caused by Streptococcus pneumoniae; COVID-19; polycythemia vera; chronic kidney disease etcetra.

Background:A new dye‐ligand chromatographic procedure has been developed to produce a highly purified factors VIII/von Willebrand complex (FVIII/vWF) concentrate from plasma cryoprecipitate.Factor VIII (FVIII) and von Willebrand factor (vWF) circulate in the plasma as a non‐covalent protein complex FVIII/vWF. The levels of factor VIII in vivo are coordinately regulated with levels of vWF.Willebrand's disease together with hemophilia A are the most common heredity diseases of the hemostasis system. The concentrate of FVIII/vWF complex is used for the treatment of these diseases.The main method of obtaining of plasma concentrates of FVIII/vWF complex remains the method of ion‐exchange chromatography. With the use of ion exchange chromatography it is not possible to maintain the initial ratio because the elution of these two factors from the ion exchanger occurs at different ionic strength values. That is, the ion‐exchange chromatography method does not allow for the absolute yield of vWF together with FVIII.Aims:investigate the ratio of FVIII/vWF complex at various stages of the technology opurification of antihemophilic concentrate.Methods:Cryoprecipitation, ion‐exchange chromatography on DEAE‐Sepharose FAST FLOW; dye‐ligand affinity chromatography.Results:We development of a new method to obtain purified preparation of the complex FVIII/vWF, that inclused cryoprecipitation, ion‐exchange chromatography on DEAE‐Sepharose FAST FLOW and dye‐ligand affinity chromatography.The degree purification of FVIII was 95.3 times on the stage of ion‐exchange chromatography. The ratio FVIII/vWF has changed approximately twice (from 0.78 to 1.75) (Table 1). We used a buffer NaCl with an ionic strength of 0.3 M for co‐elution of FVIII and vWF. However, part of the vWF was eluted with the first fractions (0.15 M NaCl).The research demonstrated that the process of purification of the FVIII and vWF with dye‐ligand is due to the phenomenon of the negative affinity adsorption. This property we used in the technology of obtaining of FVIII/vWF complex. This property provides the output level of the relationship this provides the output level of the relationship (Table 1).Summary/Conclusion: It was established that at the stage of dye‐ligand chromatography, the loss from the initial activity of FVIII is practically absent and the original ratio of FVIII/vWF is saved.image

No abstract

Проблема переробки плазми донорської крові з метою створення ефективних лікарських препаратів є актуальною. На сьогоднішній день створено велику кіль-кість методів фракціонування плазми крові, виділення і очищення її компонентів, зокрема, факторів зсідання крові та фібринолізу. Особливо привабливими з точки зору ефективності є методи біоспецифічної хроматографії. Хроматографічне очи-щення фактора VIII вважається одним із технологічно найважчих процесів через потенційний ризик його активації та нестабільність за наявності протеаз плазми крові. Для отримання очищених препаратів фактора VIII широко використовують аніонообмінну, гель-проникну й афінну хроматографії. Cинтетичні тріазинові барв-ники мають низку переваг як ліганди, тому ми дослідили можливість використання барвник-лігандної афінної хроматографії на макропористих кремнеземних носіях для виділення й очищення фактора VIII зсідання крові. У статті описано сорбцію цього фактора з різними хроматографічними сорбентами та запропоновано спосіб його очищення із кріопреципітату методом зв'язування нецільових білків на Діа-сорбі амінопропіловому з іммобілізованими тріазиновими барвниками. У результа-ті проведеної роботи було відібрано групу сорбентів, яка найкраще надається для процесу очищення фактора VIII зсідання крові: Діасорб-Активний пурпуровий 4ЖТ, Діасорб-Procion gelb M4R, Діасорб-Procion blue HB, Діасорб-Procion blue MXR та Діасорб-Активний яскраво-голубий К. Очищення фактора VIII відбувалося завдяки явищу негативної афінної хроматографії. Питома активність цього фактора зрос-тала приблизно на порядок.Ключові слова: фактор VIII зсідання крові, афінна хроматографія, тріазино-ві активні барвники. ВСТУПЗастосування класичних хроматографічних методів, наприклад, іонообмінної хроматографії чи гель-фільтрації, для виділення й очищення певних груп білків, що відрізняються за своїми фізико-хімічними властивостями незначно, пов'язане з певними труднощами та потребує тривалих затрат часу [11]. Відповідно, це при-зводить до значної втрати їхньої біологічної активності через процеси денатурації, ензиматичного гідролізу та ін.

З метою корекції дефіциту фактора або для запобігання кровотеч у пацієнтів з гемофілією А проводять замісну терапію, яка полягає у введенні плазмових або рекомбінантних препаратів фактора VIII. Для лікування гемофілії в Україні вико-ристовують низку препаратів фактора, як плазмового так і рекомбінантного похо-дження. Залежно від ступеня очищення, відрізняють плазмові препарати проміж-ного ступеня очищення, отримані за допомогою традиційних методів осадження/ адсорбції, та високоочищені препарати, виділені методами іонообмінної або афін-ної хроматографії. З кінця 1980-х років у клінічній практиці почали використовувати рекомбінантні препарати фактора. Вони одержані методами генної інженерії з лінії клітин яєчника китайського хом'яка або нирки новонародженого хом'яка. Рекомбі-нантні фактори поділяють на покоління залежно від вмісту домішкового білка лю-дини чи тварини в кінцевому продукті. У статті проведено аналіз основних плазмо-вих і рекомбінантних препаратів фактора VIII, зареєстрованих в Україні. Описані їх основні властивості, способи отримання та методи вірусної інактивації. Узагаль-нено переваги та недоліки плазмових і рекомбінантних препаратів фактора згор-тання крові.Ключові слова: згортання крові, плазмові та рекомбінантні препарати фак-тора VIII, хроматографія, вірусна безпека. ВСТУПЛікування хворих на гемофілію полягає у введенні компенсаторної кількості дефіцитного фактора згортання крові, зокрема, при гемофілії А -фактора VIII (FVIII). Проте слід зауважити, що є певна відмінність між лікуванням хворих із ге-морагічними ускладненнями та проведенням профілактичного введення FVIII. Тому на даний момент існує два види терапії: так звана "терапія на вимогу" та про-філактична [9].Наприклад, "терапія на вимогу" проводиться під час геморагічних ускладнень і потребує негайного реагування шляхом введення препарату FVIII. Профілактичне лікування полягає у періодичному введенні фактора та може бути розділене на пер-винне і вторинне. Первинна профілактика досягається довготривалим введенням Biol. Stud. 2014: 8(1); 197-204 •