The present work reports factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum. The usefulness of protoplast isolation is relevant for many different applications and has been principally used in procedures involving genetic manipulation. Osmotic stabilizers, lytic enzymes, incubation time and mycelial age were evaluated in terms of their effects on protoplast yield. The optimal condition for protoplast production included the incubation of young mycelia (48 h) in 0.6 mol l -1 NaCl as the osmotic stabilizer, with 30 mg ml -1 Lysing Enzymes from Trichoderma harzianum for 3 h of incubation. In these conditions protoplasts production was higher than 10 6 protoplatos ml -1 in the digestion mixture, number suitable enough for experiments of transformation in fungi. Sucrose concentrations of 1.2 mol l -1 and 1 mol l -1 were the most suitable osmotic stabilizers for the regeneration after 48 h, with rates of 16.35% and 14.54%, respectively. This study produced an efficient method for protoplast production and reverted them into a typical mycelial morphology using a Colletotrichum lindemuthianum LV115 isolate.Index terms: Protoplast formation, lytic enzyme, anthracnose, osmotic stabilizer, filamentous fungi. RESUMOO presente trabalho apresenta os fatores que afetam a produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum lindemuthianum. O isolamento de protoplastos é muito relevante para diferentes aplicações, principalmente, em procedimentos que envolvem a manipulação genética. Estabilizadores osmóticos, enzimas líticas, tempo de incubação e idade micelial foram testados com relação ao efeito na liberação de protoplastos. As condições otimizadas para produção de protoplastos foram incubação de micélio jovem (48 h) em estabilizador osmótico NaCl 0.6 mol l -1 , acrescido de 30 mg ml -1 da enzima Lysing Enzymes de Trichoderma harzianum incubado, durante 3 h. Nessas condições, a obtenção de protoplastos foi maior que 10 6 protoplatos ml -1 na mistura de digestão, número suficientemente adequado para experimentos de transformação em fungos. Sacarose nas concentrações de 1.2 mol l -1 e 1 mol l -1 foram os estabilizadores mais apropriados para a regeneração, após 48 h, sendo as taxas de regeneração de 16.35% e 14.54%, respectivamente. Este estudo produziu um método eficiente para produção e reversão de protoplastos à morfologia micelial típica de Colletotrichum lindemuthianum utilizando o isolado LV115.Termos para indexação: Formação de protoplastos, enzima lítica, antracnose, estabilizador osmótico, fungo filamentoso.
Angular leaf spot (ALS), caused by the fungus Pseudocercospora griseola, is one of the most important foliar fungal diseases in common bean (Phaseolus vulgaris L.). The search for new sources of resistance to ALS is a promising activity in common bean breeding programs. In this study, the reaction of 416 germplasm accessions from the Universidade Federal de Lavras (UFLA) to P. griseola (race 63-63, the most important and most aggressive race) was assessed under greenhouse conditions (plants in the V2 stage, fully developed unifoliolate leaves). We identified 102 (24.5%) resistant and 314 (75.5%) susceptible accessions. Among the resistant lines, more than half are Carioca grain type lines. This study characterizes the resistance of a wide collection of common bean genotypes. The identification of new accessions resistant to P. griseola is an important step in common bean breeding programs. These lines can continually be incorporated in backcrosses to obtain cultivars resistant to ALS.
O objetivo deste estudo foi avaliar a diversidade das espécies que compõem a agrobiodiversidade de quintais agroflorestais (e matas entorno) de propriedades situadas na região periurbana de Sinop, Mato Grosso. Foram selecionadas dez propriedades mediante visitas às feiras e junto à Secretaria de Agricultura Municipal. Aplicaram-se questionário semi-estruturado e a técnica da lista livre aos agricultores, sendo as espécies citadas classificadas com o sistema APG III (Angiosperm Phylogeny Group) e uso das plataformas “The Plant List” e “Flora do Brasil 2020”. Os dados foram analisados mediante estatística não-paramétrica. Os agricultores informantes são a maioria mulheres, naturais da região Sul do país, com idade média de 59 anos, os quais vivem no local há mais de 20 anos. No total, 161 espécies foram identificadas. Destas, um terço são nativas e o restante exóticas. O Índice de Shannon (H’) para o total das espécies foi 4,87. As espécies estão distribuídas em 55 famílias, sendo Fabaceae a mais representativa. A agricultura periurbana apresentada nesta pesquisa mantém elevada riqueza de diversidade interespecífica e contribui para a segurança alimentar e econômica dos agricultores.
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