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1. Growth of Staphylococcus aureus (8325; alphai(-)p(+)), constitutive for the production of penicillinase, in CY medium results in about 40% of the enzyme being free in the medium. By modifying the medium, 98% of the enzyme remains cell-bound. 2. Part of this is bound ionically to the surface of the cell wall and may be liberated instantaneously by certain inorganic anions. Maximum liberation was achieved with either phosphate or arsenate, both of which showed marked pH-dependence. 3. Polyanions that do not penetrate the cell wall, such as heparin, RNA and dextran sulphate, are also effective in liberating penicillinase. 4. Polyanions added to the growth medium prevent the appearance of ionically bound penicillinase owing to their strong affinity for the sites on the cell wall required for binding of the enzyme.

ZusammenfassungEs wurden in ungewaschenen und mehrfach gewaschenen Thrombozyten quantitativ folgende Fermente der Glykolyse, des Pentosephosphat- und Zitronensäurezyklus, der Atmungskette, der Phosphatspaltung und der Transaminie-rungen bestimmt:Hexokinase, Diphosphofruktosealdolase, Trioseisomerase, L-a-Glycerophos-phatdehydrogenase, Phosphoglyceraldehydrogenase, 3-Phosphoglycerat-l -Kinase, Enolase, Pyruvatkinase, Milchsäuredehydrogenase, Glukose-6-Phosphatdehydro-genase, 6-Phosphoglukonatdehydrogenase, TPNH-Oxydase, Isozitronensäure-dehydrogenase, Succinodehydrogenase, Äpfelsäuredehydrogenase, globale Atmungskettenbestimmung, Myokinase, Mg++-aktivierte ATPase, Ca++-aktivierte ATPase, alkalische Phosphatase, Glutamat-Oxalacetat-Transaminase, Glutamat-Pyruvat-Transaminase.Außerdem wurden an ungewaschenen und mehrfach gewaschenen Blutplättchen Gesamtstoffwechselmessungen sowie Bestimmungen von Intermediär- und Endprodukten des Stoffwechsels vorgenommen, wie Glukoseverbrauch, Milchsäurebildung, Pyruvatbildung, CO2-Bildung, O2-Verbrauch, zusätzlich Bestimmungen der energiereichen Phosphate ATP, ADP und AMP.Folgende Ergebnisse wurden erhalten:1. Die Blutplättchen enthalten die vollständigen Stoffwechselketten der Glykolyse, des Pentosephosphat- und Zitronensäurezyklus, die Atmungskette, 3 ATP-spaltende Fermente und Transaminasen.2. Der Gehalt an glykolytischen Enzymen übersteigt bei weitem den Gehalt an Enzymen des oxydativen Kohlenhydratabbaues.3. Die begrenzende Reaktion der Glykolyse in den Thrombozyten ist die Hexokinase-Reaktion.4. Der Stoffwechsel der Blutplättchen im Vergleich zu anderen Zellelementen ist groß.5. Auch unter aeroben Bedingungen wird über die Hälfte der abgebauten Glukose zu Pyruvat und Laktat glykolysiert; nur etwa 1/5 der Glukose wird zu CO2 und H2O verbrannt. ¼ der abgebauten Glukose wurde in den Stoffwechselendprodukten nicht wiedergefunden; es wird angenommen, daß sie zu Glykogen, Aminosäuren und Lipiden metabolisiert wird.6. Der respiratorische Quotient (R.Q.) der Thrombozyten beträgt 1,1, was für einen vorwiegenden Kohlenhydratstoffwechsel spricht.7. Der ATP-Gehalt der Blutplättchen ist auffallend hoch und liegt etwa 150mal höher als der ATP-Gehalt der Erythrozyten, bezogen auf das Gesamtprotein der Zellen. Das Verhältnis von ATP : AMP : ADP betrug bei unseren Messungen 3,1 : 2,3 : 1 und liegt damit in der Größenordnung anderer Organe. Dieser Befund spricht dafür, daß bei unseren Versuchsbedingungen die Plättchen nicht geschädigt wurden.8. Unter dem Einfluß von 1 bis 3 Thrombozytenwaschungen kommt es zu einem weitgehenden Verlust der meisten für den Energiehaushalt wichtigen Enzyme, besonders der phosphatgruppenübertragenden Fermente 3-Phospho-glycerat-1-Kinase und Pyruvatkinase mit der Folge eines starken ATP-Verlustes der Plättchen. Der Zellstoffwechsel wird durch Plättchenwaschungen deutlich beeinträchtigt.9. Enzym- und Stoffwechseluntersuchungen sollten wegen ihrer Beeinträchtigung durch Thrombozytenwaschungen möglichst an vom Plasma abgetrennten, ungewaschenen Blutplättchen durchgeführt werden. Vergleichende Untersuchungen an Plasmaenzymen zeigten, daß die Meßfehler durch anhaftende Plasmafermente unbedeutend sind und nur etwa 1 bis 10% ausmachen.10. Eine direkte Abhängigkeit der Retraktionsfähigkeit der Blutplättchen von ihrem Energiestoffwechsel konnte durch Hemmversuche der ATP-liefernden Reaktionen der Glykolyse wahrscheinlich gemacht werden. Bei normaler oder erhöhter Thrombozytenzahl führen 1 bis 3 Waschungen zu einer eben noch erkennbaren Störung der Retraktion, die bei suboptimaler Thrombozytenkonzen-tration deutlicher wird.11. Vergleichende Untersuchungen über die Enzymverteilungsmuster und die Berechnung der Anteile der einzelnen Enzymproteine am Gesamtprotein der Zellen weisen auf Ähnlichkeiten zwischen dem Stoffwechsel von Skelettmuskulatur und Thrombozyten hin. Beiden Zellelementen ist die Fähigkeit zu mechanischer Arbeit gemeinsam.

To investigate the role of increased free fatty acid (FFA) mobilization in the hyperglycemia, ketonemia, hyperlipemia and fatty liver produced by acute insulin deficiency, nicotinic acid was used to inhibit FFA mobilization in rats given guinea pig anti-insulin serum (AIS). Effects on concentration of plasma FFA, blood glucose and betahydroxybutyric acid (BHBA), and plasma and liver lipids were studied acutely after nicotinic acid administration and during six and twenty-four hours of treatment with this compound.Nicotinic acid produced an immediate fall in plasma FFA and a lesser but significant decrease in blood glucose when given two hours after AIS. When treatment was begun simultaneously with administration of AIS and repeated every four hours, plasma FFA and plasma and liver lipids were kept at normal control levels or lower for at least six hours, and blood BHBA for eighteen hours. Blood glucose remained at 70 per cent of values in untreated rats for eighteen hours, yet exceeded control levels during this time. At twenty-four hours there were no important differences between treated and untreated animals in any parameter except plasma triglycerides. This change was possibly related to a rebound of FFA levels in the nicotinic acid treated group.The effects of nicotinic acid on plasma FFA, blood BHBA and plasma and liver lipids are most likely due to inhibition of FFA release from adipose tissue. Increased FFA mobilization in acute insulin deficiency could thus explain the increase in concentration of these substances during the first several hours after AIS administration. The mechanism of action of nicotinic acid and the influence of plasma FFA levels on glucose concentration is less clear. DIABETES 17:353-61, June, 1968. It has been known for several years that plasma free fatty acid (FFA) levels are elevated in diabetes mellitus, 1>2 and this has been found to be due to accelerated mobilization of fatty acids from adipose tissue.