Resumen OBJETIVO: Determinar los gérmenes más frecuentes causantes de infecciones en recién nacidos hospitalizados y la susceptibilidad antimicrobiana. MATERIAL Y MÉTODOS: Revisión de historias clínicas del Servicio de Neonatología del Instituto de Salud del Niño (Lima, Perú) y resultados de cultivos positivos y antibiogramas, desde junio de 1999 hasta mayo de 2002. RESULTADOS: Durante el periodo de estudio hubo 94 pacientes con sepsis confirmada; de ellos se obtuvo 161 muestras (sangre, orina, catéteres EV, entre otras). Los gérmenes más frecuentes fueron: Staphylococcus epidermidis (38,3%), Staphylococcus aureus (12%), Klebsiella sp (10%), Alcaligenes fecalis (4,6%), Acinetobacter sp (4%) y Pseudomonas aeruginosa (4%). S. epidermidis mostró sensibilidad de 100% a vancomicina, 90% a cefotaxima, 50% a amikacina y ampicilina y 37% a oxacilina. Klebsiella mostró sensibilidad de 100% a ciprofloxacina e imipenen, 44% a ceftriaxona, 20% a ceftazidima y 14% a ampicilina; la resistencia a amikacina fue del 100%. S. aureus mostró sensibilidad de 100% a vancomicina, 57% a cefotaxima y 33% a oxacilina. CONCLUSIONES: Las bacterias gram positivas son las más frecuentes como causa de sepsis neonatal. In vitro, los gérmenes más frecuentes muestran resistencia mayor de 50% a ampicilina y amikacina; y vancomicina es el antibiótico al cual muestran mayor susceptibilidad las especies de During this three year period there were 94 patients with confirmed sepsis from whom 161 samples were obtained (blood, urine, IV catheters, and others ). The most frequently isolated bacteria were: Staphylococcus epidermidis (38,3%), Staphylococcus aureus (12%), Klebsiella sp (10%), Alcaligenes fecalis (4,6%), Acinetobacter sp (4%) and Pseudomonas aeruginosa (4%). S. epidermidis showed 100% sensitivity to vancomycin, 90% to cefotaxime, 50% to amikacin and ampicillin and 37% to oxacillin. Klebsiella showed 100% sensitivity to ciprofloxacin and imipenem, 44% to ceftriaxone, 20% to ceftazidime and 14% to ampicillin; bacterial resistance to amikacin was 100%. S. aureus showed 100% sensitivity to vancomycin, 57% to cefotaxime and 33% to oxacillin. CONCLUSIONS: Gram positive bacteria are the most frequent cause of neonatal sepsis. In vitro, 50% of the most frequent bacteria showed resistance to ampicillin and amikacin. The Staphylococcus species showed greater in vitro sensitivity to vancomycin.