The viscous seminal plasma (SP) is currently a major impediment to the handling of ejaculate and the development of some biotechnologies in South American camelids. The vas deferens-collected spermatozoa of alpacas is a useful technique to avoid this problem. On the other hand, SP contains a large protein component that has been implicated in the function of spermatozoa within the female reproductive tract. In this sense, the low fertility achieved using transcervical insemination with frozen-thawed spermatozoa in alpacas could be improved by adding SP. This study aimed to evaluate the effect of the whole SP on some in vitro parameters of alpaca spermatozoa after the freezing-thawing-process and the fertility after artificial insemination. It would contribute to a better understanding of the interaction between thawed sperm cells and SP. Spermatozoa were obtained by surgically diverted vas deferens. The samples were diluted with a Tris-based extender, packaged in straws, and frozen. At thawing, each straw was divided into two post-thawing conditions: with the addition of 10% of PBS (control) or with 10% SP (treatment). The sperm cells were evaluated using dynamic parameters, sperm cell morphology, and morphometry. Fertility was assessed by an artificial insemination trial. All in vitro parameters were analyzed by ANOVA. A heterogeneity test was scheduled for the fertility trial. After the freezing-thawing process, motility and plasma membrane functionality was improved when SP was added. No differences were found for post-thaw viability between the control and treatment samples. The percentage of normal cells was higher with SP at post-thawing, and a decrease of the presence of bent tailed spermatozoa with a droplet in the SP group was observed. The length of the head spermatozoa was 3.4% higher in the samples with PBS compared to those in which SP was added. Females pregnant at day 25 post-insemination were 0/12 (with SP inside the straw) and 1/10 (without SP inside the straw). In conclusion, the presence of 10% SP at post-thawing improves sperm cells' motility, functionality, and morphology, indicating that it would be beneficial to improve the frozen-thawed alpaca's physiology spermatozoa. More fertility trials must be developed to increase this knowledge.

KEY WORDS:Viabilidad in vitro e in vivo de los espermatozoides congelados/descongelados del conducto deferente de alpacas (Vicugna pacos)Viability in vitro and invivo of sperm frozen/thawed from alpaca (Vicugna pacos) vas deferens El objetivo del presente estudio fue evaluar la viabilidad in-vitro e in-vivo de los espermatozoides procedente de los conductos deferentes de alpacas. Se utilizaron 2 reproductores como donadores de espermatozoides con desviación del conducto deferente. Los espermatozoides colectados se sometieron a la congelación y descongelación con el dilutor Triladyl®. Durante el procesamiento de los espermatozoides se evaluaron la motilidad y la prueba hipo-osmotica. En la inseminación se evaluó la proporción de gestaciones producidas. Los resultados fueron los siguientes: La motilidad de los espermatozoides para los reproductores 1 y 2 fueron: a los 37°C 65.16 y 63.37% sin diferencia (P>0.05), al enfriamiento (5°C) 52.63 y 48.31% similares (P>0.05) ya la descongelación 24.51 y 33.18% mostraron diferencia (P<0.05). A la prueba hipo-osmótica fueron; a los 37°C 51.55 y 52.98% similares (P>0.05), Al enfriamiento (5°C) 46.67 y 55.93% mostraron diferencia (P<0.05) y a la descongelación 20.06 y 32.18% con diferencia (P<0.05). Las gestaciones fueron: Con espermatozoides frescos diluidos 36.36% (4/11), con espermatozoides descongelados 25.00% (5/20) y con monta 54.54% (6/11), siendo similares (P>0.05). En conclusión los espermatozoides procedentes de los conductos deferentes soportan el congelamiento y a la inseminación artificial producen gestaciones.The aim of this study was to evaluate the in-vitro and in-vivo viability of sperm from the vas deferens alpacas. 2 males as sperm donors were used to offset the vas deferens. The collected sperm cells were subjected to freezing and thawing with dilutor Triladyl®. During processing of sperm motility and hypo-osmotic test they were evaluated. Insemination in the proportion of pregnancies produced was evaluated. The results were as follows: The sperm motility of males 1 and 2 were: at 37 ° C 65.16 and 63.37% with no difference (P> 0.05), cooling (5 ° C) 52.63 and 48.31% similar (P > 0.05) and thawing 24.51 and 33.18% showed no difference (P <0.05). The hypo-osmotic test were; at 37 ° C 51.55 and 52.98 similar percentage (P> 0.05), and cooling 55.93% 46.67 showed no difference (P <0.05) and thawing 20.06 and 32.18% with difference (P <0.05). Pregnancies were diluted with fresh sperm 36.36% (4/11), with defrosted sperm 25.00% (5/20) and 54.54% mounts (6/11), being similar (P> 0.05). In conclusion sperm from the vas deferens withstand freezing and insemination are able to produce pregnancies.

El objetivo del estudio fue determinar el efecto de tres curvas de congelación sobre la viabilidad pos-descongelación de espermatozoides colectados del conducto deferente de llamas. Se utilizaron seis llamas machos con desviación quirúrgica de los conductos deferentes. Las muestras de los seis machos se mezclaron para su procesamiento (pools) y se diluyeron con Tris-yema de huevo. Se procedió al enfriamiento hasta los 5 °C donde se completó la dilución (dilutor con glicerol) y se mantuvo por media hora (fase de equilibrio). Las muestras en pajillas de 0.25 ml fueron sometidas a congelamiento utilizando una tasa de descenso de temperatura de -20°C/min hasta llegar a -80°C (TI), a -100 °C (TII) y a -120 °C (TIII) en 4, 5 y 6 minutos, respectivamente, para finalmente almacenarlas en nitrógeno líquido. Las muestras fueron colectadas durante tres meses (n=19 pooles). Se determinó la motilidad total (motilidad progresiva, circular, oscilatoria), viabilidad y funcionalidad de membrana luego de la colecta, en la fase de equilibrio y al descongelamiento. Se observó una disminución significativa (p˂0.05) en todas las características espermáticas evaluadas en las muestras equilibradas respecto a las muestras luego de la colecta. Se obtuvo una correlación alta positiva entre viabilidad y motilidad total (r2=0.78) y en fase de equilibrio entre funcionalidad de membrana y motilidad total (r2=0.881) En las muestras descongeladas, la motilidad total y viabilidad fueron significativamente mayores en las muestras congeladas con la curva de congelamiento TIII respecto al TI (p=0.041 y p=0.003, respectivamente). No se observaron diferencias significativas en la funcionalidad de membrana entre las tres curvas de congelamiento (p˃0.27). En conclusión, la curva de descenso de la temperatura hasta los -120 °C utilizando una tasa de -20 °C/min sería la más adecuada para criopreservar espermatozoides de llama obtenidos a partir de la desviación de los conductos deferentes.

La dinámica folicular ovárica monitoreada por vía transrectal (TR) y transvaginal (TV) en ondas sucesivas en llamas fue estudiada en 10 llamas con más de 4 años, multíparas, sin cría, estado corporal de 3.0, durante un periodo de 90 días en la época reproductiva. Se utilizó el ecógrafo Sonostar SS8® con un transductor lineal para el examen transrectal y transductor microconvexo endocavitario para el examen transvaginal, ambos con frecuencia de 6.5 MHz. El intervalo inter-onda fue de 20±4.4 y 22.5±5.3 por vía TR y TV, respectivamente; el número de folículos por cohorte fue 5.21±0.92 y 6.38±1.26 para TR y TV, respectivamente (p=0.0011); el diámetro máximo de folículos fue 12.49±3.57 mm para TR y 13.56±3.91 mm para TV; la tasa de crecimiento fue de 0.70±0.35 y 0.67±0.32 mm/día para TR y TV, respectivamente. La ecuación de regresión para relación del diámetro máximo folicular y duración de onda folicular vía TR fue de y=0.89766x+6.5554 (R²=0.423) y para la vía TV de y=0.8466x+10.184 (R²=0.479). La duración de las fases foliculares fue similar entre ambas técnicas con excepción de la fase de dominancia (10.2±3.19 días para TR y 8.67±2.46 para TV, p=0.0418). La relación entre el diámetro folicular y número de folículos detectados presentó una correlación negativa baja (R²=-0.0827 para TV y R²=-0.0876 para TR). En conclusión, el transductor endocavitario transvaginal permite determinar con mayor precisión las características de dinámica folicular en llamas en sus fases de reclutamiento, dominancia y regresión con sobreposición de ondas foliculares como característica importante.The ovarian follicular dynamics monitored by transrectal (TR) and transvaginal (TV) routes in successive waves was studied in 10 llamas older than 4 years, multiparous, without calves at foot, body condition of 3.0, during a period of 90 days in the reproductive season. The Sonostar SS8® ultrasound equipment was used with a linear transducer for transrectal examination and endocavitary microconvex transducer for transvaginal examination, both with a frequency of 6.5 MHz. The inter-wave interval was 20 ± 4.4 and 22.5 ± 5.3 via TR and VT, respectively; the number of follicles per cohort was 5.21 ± 0.92 and 6.38 ± 1.26 for TR and TV, respectively (p=0.0011); the maximum diameter of follicles was 12.49 ± 3.57 mm for TR and 13.56 ± 3.91 mm for TV; the growth rate was 0.70 ± 0.35 and 0.67 ± 0.32 mm/day for TR and TV, respectively. The regression equation for the ratio of the maximum follicular diameter and duration of follicular wave via TR was y=0.89766x+6.5554 (R²=0.423) and for the TV route y=0.8466x+10.184 (R²=0.479). The duration of the follicular phases was similar between both techniques except for the dominance phase (10.2±3.19 days for TR and 8.67±2.46 for TV, p=0.0418). The relationship between the follicular diameter and the number of follicles detected showed a low negative correlation (R²=-0.0827 for TV and R²=-0.0876 for TR). In conclusion, the transvaginal endocavitary transducer makes it possible to determine with greater precision the characteristics of llama follicular dynamics in their recruitment, dominance and regression phases with overlapping of follicular waves as an important characteristic.

No abstract