Some species of Trichoderma have successfully been used in the commercial biological control of fungal pathogens, e.g., Sclerotinia sclerotiorum, an economically important pathogen of common beans (Phaseolus vulgaris L.). The objectives of the present study were (1) to provide molecular characterization of Trichoderma strains isolated from the Brazilian Cerrado; (2) to assess the metabolic profile of each strain by means of Biolog FF Microplates; and (3) to evaluate the ability of each strain to antagonize S. sclerotiorum via the production of cell wall-degrading enzymes (CWDEs), volatile antibiotics, and dual-culture tests. Among 21 isolates, we identified 42.86% as Trichoderma asperellum, 33.33% as Trichoderma harzianum, 14.29% as Trichoderma tomentosum, 4.76% as Trichoderma koningiopsis, and 4.76% as Trichoderma erinaceum. Trichoderma asperellum showed the highest CWDE activity. However, no species secreted a specific group of CWDEs. Trichoderma asperellum 364/01, T. asperellum 483/02, and T. asperellum 356/02 exhibited high and medium specific activities for key enzymes in the mycoparasitic process, but a low capacity for antagonism. We observed no significant correlation between CWDE and antagonism, or between metabolic profile and antagonism. The diversity of Trichoderma species, and in particular of T. harzianum, was clearly reflected in their metabolic profiles. Our findings indicate that the selection of Trichoderma candidates for biological control should be based primarily on the environmental fitness of competitive isolates and the target pathogen.

Trichoderma harzianum ALL42 were capable of overgrowing and degrading Rhizoctonia solani and Macrophomina phaseolina mycelia, coiling around the hyphae with formation of apressoria and hook-like structures. Hyphae of T. harzianum ALL42 did not show any coiling around Fusarium sp. hyphae suggesting that mycoparasitism may be different among the plant pathogens. In this study, a secretome analysis was used to identify some extracellular proteins secreted by T. harzianum ALL42 after growth on cell wall of M. phaseolina, Fusarium sp., and R. solani. The secreted proteins were analyzed by two-dimensional electrophoresis and MALDI-TOF mass spectrometry. A total of 60 T. harzianum ALL42 secreted proteins excised from the gel were analyzed from the three growth conditions. While seven cell wall-induced proteins were identified, more than 53 proteins spots remain unidentified, indicating that these proteins are either novel proteins or proteins that have not yet been sequenced. Endochitinase, β-glucosidase, α-mannosidase, acid phosphatase, α-1,3-glucanase, and proteases were identified in the gel and also detected in the supernatant of culture.

Trichoderma harzianum species are well known as biocontrol agents against important fungal phytopathogens. Mycoparasitism is one of the strategies used by this fungus in the biocontrol process. In this work, we analyzed the effect of Epl-1 protein, previously described as plant resistance elicitor, in expression modulation of T. harzianum genes involved in mycoparasitism process against phytopathogenic fungi; self cell wall protection and recognition; host hyphae coiling and triggering expression of defense-related genes in beans plants. The results indicated that the absence of Epl-1 protein affects the expression of all mycoparasitism genes analyzed in direct confrontation assays against phytopathogen Sclerotinia sclerotiorum as well as T. harzianum itself; the host mycoparasitic coiling process and expression modulation of plant defense genes showing different pattern compared with wild type strain. These data indicated the involvement T. harzianum Epl-1 in self and host interaction and also recognition of T. harzianum as a symbiotic fungus by the bean plants.

No abstract

Ciênc. Tecnol. Aliment., Campinas, 23(3): 337-341, set.-dez. 2003 337Comparação de métodos para a determinação de açúcares redutores e totais em mel, Asquieri et al. -INTRODUÇÃOOs monossacarídeos, glicose e frutose são açúcares redutores por possuírem grupo carbonílico e cetônico livres, capazes de se oxidarem na presença de agentes oxidantes em soluções alcalinas. Os dissacarídeos que não possuem essa característica sem sofrerem hidrólise da ligação glicosídica são denominados de açúcares não redutores. A análise desses açúcares é uma atividade rotineira nos laboratórios das indústrias alimentícias, nas quais pode-se observar uma certa carência, no que se refere a técnicas padronizadas para análises.Diversos reativos são utilizados para demonstrar a presença de grupos redutores, em açúcares [21]. De fato, os monossacarídeos podem ser oxidados por agentes oxidantes relativamente suaves tais como os íons férricos (Fe 3+ ) e cúprico (Cu 2+ ).Para se estimar o teor de açúcares redutores e açú-cares redutores totais em alimentos, existem vários mé-todos químicos não seletivos que fornecem resultados, com elevado grau de confiabilidade, quando utilizados corretamente após eliminação de interferentes [1]. Outros métodos mais seletivos vêm sendo estudados e aplicados em menor escala como a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), que identifica uma maior variedade de carboidratos na amostra, por ser mais sensível, além de possuir um tempo de análise pequeno [4] e as determinações enzimáticas que sendo muito específicas, não vão sofrer ação de possíveis interferentes com grupos redutores livres [6,17].Os métodos químicos clássicos conhecidos para a análise de açúcares redutores são na sua maioria fundamentados na redução de íons cobre em soluções alcalinas (solução de Fehling), mas também existem aqueles fundamentados na desidratação dos açúcares, por uso de ácidos concentrados, com posterior coloração com compostos orgânicos, além da simples redução de compostos orgânicos, formando outros compostos de coloração mensurável na região do visível [5,9,12,13].Os métodos podem ser agrupados tanto em titulométricos (EDTA e Lane-Enyon, Luff-Schoorl) [ Este trabalho foi realizado com o propósito de suprir a necessidade dos laboratórios de análise de alimentos no que se refere a técnicas na determinação de açúcares redutores (A.R) e açúcares totais (A.T), utilizando as metodologias de ADNS, Antrona, EDTA, Lane-Eynon, Fenol Sulfúrico, Luff-School, Munson-Walker, Somogyi-Nelson, cromatografia em camada delgada e refratometria medida na escala Brix. O mel goiano foi utilizado como amostra, visto ser um alimento muito rico em açúcares [7]. RESUMOEste trabalho teve como objetivo comparar vários métodos para a determinação de açúcares redutores (A.R) e totais (A.T) em mel, a fim de suprir carências dos laboratórios de análises de alimentos das indústrias alimentícias e adaptar o método de ADNS (Ácido 3,5-Dinitrossalicílico) para análise de açúcares totais. Foram utilizadas quinze amostras de méis procedentes de diferentes cid...