Резюме. Охарактеризованы видовой состав, чувствительность к антимикробным препаратам, частота встре-чаемости и типы карбапенемаз карбапенемаза-продуцирующих грамотрицательных бактерий, выделеных в ФГБУ «РНЦРХТ» МЗ РФ с февраля 2014 г. по апрель 2016 г. Скрининг карбапенем-резистентных бактерий проводился путем посева биоматериала на хромогенные среды (CHROMagar KPC, DRG, Франция), а их ви-довая идентификация -методом матричной лазерной десорбционной времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI-TOF MS) на анализаторе VITEK MS (bioMérieux, Франция). Чувствительность грамотрицательных бактерий к антимикробным препаратам определялась на анализаторе VITEK-2 (bioMérieux, Франция). Полу-ченные результаты интерпретировались в соответствии с критериями EUCAST v. 6.0, 2016. Гены, кодирующие карбапенемазы групп КРС, ОХА-48/162, VIM, IMP, NDM, OXA-51, OXA40/24, OXA-23 и OXA-58 выявлялись методом мультиплексной ПЦР в реальном времени (АмплиСенс, Россия). Выделено 813 клинически значи-мых штаммов бактерий (602 пациента), в том числе 405 грамотрицательных, среди которых 5,1% (21 штамм от 16 пациентов) нечувствительных к меропенему и/или имипенему: Klebsiella pneumoniae (n = 5), Enterobacter cloacae (n = 2), Serratia marcescens (n = 1), Pseudomonas aeruginosa (n = 3), Acinetobacter baumannii (n = 10). Из кли-нического материала 4-х пациентов одновременно выделено до 3-х штаммов разных видов нечувствительных к карбапенемам бактерий. У 84% нечувствительных к карбапенемам изолятов обнаружены гены, кодирую-щие приобретенные карбапенемазы: у A. baumannii -OXA40/24 (n = 8); у K. pneumoniae -OXA-48 (n = 1), КРС (n = 1) и NDM (n = 2); у P. aeruginosa -VIM (n = 1) и KPC (n = 1); у E. cloacae -КРС (n = 1). OXA-48 карба-пенемаза обнаружена также в одном карбапенем-чувствительном штамме K. pneumoniae. Все карбапенема-за-продуцирующие штаммы имели фенотип множественной резистентности к антимикробным препаратам. Результаты исследования показали, что хотя доля карбапенем-нечувствительных штаммов среди грамотри-цательных бактерий сравнительно невелика, все они обладают множественной устойчивостью к антими-кробным препаратам и в большинстве из них обнаружены гены приобретенных карбапенемаз. Видовой со-став и типы обнаруженных приобретенных карбапанемаз характерны для территории России. У K. pneumoniae и P. aeruginosa не выявлено превалирования какого-либо одного типа карбапенемаз, в то время как у всех штаммов A. baumannii обнаружен ген OXA40/24 карбапенемазы.

DUSP9 / MKP-4 belongs to a subclass of bispecific protein phosphatases, which, by dephosphorylation of MAP kinases (ERK1 / 2, p38 and JNK), negatively regulate the activity of MAP kinase cascades. Hyperactivation of MAP kinase cascades is observed in many different cancer types, including kidney cancer. We have previously found that in human clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) DUSP9 is downregulated. In this study, using the semi-quantitative RT-PCR method, we evaluated the expression level of DUSP9 in tumors of patients with different stages of renal cell carcinoma of three histological variants: ccRCC (26 samples), papillary (2 samples) and chromophobic (1 sample). For each tumor 3 distantly located pieces were analyzed. We showed that DUSP9 mRNA level was significantly reduced in all three pieces of each tumor compared with normal tissue. Promoter hypermethylation may be one mechanism of gene repression in cancer. Using the DNA demethylating agent 5-Aza-2'-deoxycytidine and RCC cell lines we showed a correlation between the mRNA level and methylation level of the promoter region of DUSP9 gene. We then analyzed methylation level of DUSP9 promoter in 31 clinical samples of RCC (11 female and 20 male patients). It was increased in 10 out of 11 female RCC. In men, the methylated alleles of DUSP9 were not detected in either tumor or paired normal specimens. The results of our study indicate that DUSP9 transcriptional repression is an early event in kidney carcinogenesis and that DUSP9 expression in RCC can be regulated epigenetically via DNA methylation of the gene promoter, in a sex-related manner. They also indicate the existence of alternative mechanisms of inactivation of the DUSP9 gene in RCC.

Early diagnosis of renal cancer carcinoma is a key determinant of patient survival. The asymptomatic disease course and lack of reliable diagnostic markers lead to the fact that more than 30 % renal cancer cases discovered at an advanced stage, when the prognosis is poor because kidney tumors are resistant to standard chemotherapy and radiation. More than 30 % of renal cancer carcinoma recur or metastasize after surgical treatment. Despite the implementation of novel targeted drugs and immune point inhibitors, the 5-year survival rate for metastatic renal cancer carcinoma remains dismal. Unsatisfactory result of renal cancer treatment may be caused by high inter- and intra-tumor heterogeneity and tumor evolution during therapy, as well as the lack of predictive and on-treatment monitoring biomarkers. Liquid biopsy test that utilizes free-circulating DNA (cfDNA) in the blood of patients, opens up new opportunities for managing patients with renal cancer. The diagnostic and predictive potential of these minimally invasive biomarkers has been demonstrated for various types of cancer. The use of highly sensitive methods of cfDNA analysis may allow early cancer detection and prediction of postoperative disease recurrence before dinical and radiographic progression. Serial cfDNA samples, that were collected before and during course of treatment, can provide information about the dynamic mutational changes in the volume of the entire tumor and metastases in real time, and the emergence of drug resistance during treatment. This information may be promising toolfor optimizing patient-specific therapeutic strategies. This review is focusing on the potential clinical application of cfDNA from blood in renal cancer.

Поиск новых мишеней для терапевтического воздействия на метастатическую форму карциномы почки (КП) остается актуальной задачей на сегодняшний день. Одной из таких мишеней может быть протеинфосфатаза DUSP9. О значительном снижении уровня мРНК DUSP9 в клинических образцах КП по сравнению c нормальной тканью впервые сообщили Чебуркин с соавторами в 2002 году [1]. Позднее мы показали, что подавление экспрессии мРНК DUSP9 происходит уже на ранних стадиях заболевания. Мы также показали, что экспрессия гена DUSP9 при КП может регулироваться на эпигенетическом уровне и, кроме того, дифференциально, в зависимости от пола пациента. В последующие годы, онкосупрессорные свойства DUSP9 при КП были подтверждены другими исследователями. Целью данной работы было изучение влияния экзогенной экспрессии гена DUSP9 на пролиферацию и миграцию клеток КП человека. Материалы и методы. В работе использовалась DUSP9-негативная линия КП человека ACHN. Трансфекцию клеток проводили сконструированным нами DUSP9-экспрессирующим вектором. Эффективность трансфекции оценивали методами иммунофлуоресценции и вестерн-блота, количество жизнеспособных клеток MTT-тестом, скорость миграции клеток скрэтч-тестом. Внеклеточные везикулы из кондиционной среды выделяли, используя SubXTM технологию, и характеризовали методом анализа траекторий наночастиц и вестерн-блотом. Результаты. Эффективность трансфекции варьировала от 70% до 90%. Количество жизнеспособных клеток, экспрессирующих DUSP9, и клеток, трансфицированных вектором без вставки, различалась незначительно 48 часов после трансфекции. Экспрессия DUSP9 статистически значимо уменьшала скорость миграции клеток по сравнению с контролем. Белок DUSP9 обнаруживался в экзосомной фракции бессывороточной кондиционной среды от клеток, трансфицированных DUSP9-экспрессирующим вектором. Выводы. Мы показали, что экзогенная экспрессия DUSP9 замедляет миграцию клеток КП. Результат указывает на то, что одной из возможных ролей DUSP9 в канцерогенезе почки может быть регулирование процесса метастазирования.