Исследовано взаимодействие ДНК, выделенной из селезенки коровы, с загрязняющими ее примесными белками. Показано, что последние не являются гистонами и их связи с ДНК разрушаются в присутствии мочевины, но сохраняются при высоких концентрациях Na + . Примесные белки не изменяют термостабильности ДНК и распределены между макромолекулами неравномерно: менее 10 % ДНК содержат более 70 % всех белков.Введение. Для разработки эффективных промышленных методов выделения и очистки нуклеиновых кислот необходимы данные о характере их взаимодействия с загрязняющими примесными белками, присутствующими в образцах. Это позволит найти оптимальные условия разрушения комплекса. Целесообразно также исследовать влияние примесных белков на стабильность двойной спирали ДНК, поскольку ряд методов очистки включает нагревание растворов, содержащих ДНК, до 60 і -70 °С. В связи с этим в дайной работе проведено физико-химическое исследование комплексообразования ДНК с остаточными примесными белками, выделена фракция ДНК, ими обогащенная, и исследована термостабильность ДНК в составе этой фракции.
Материалы и методы. В работе использовали додецилсульфат натрия(DS-Na), бычий сывороточный альбумин (БСА), цитохром С, яичный альбумин, химотрипсиноген фирмы «Serva» (ФРГ). Отечественные реактивы имели квалификацию «хч» или «осч» и не требовали дополнительной очистки. Концентрированные растворы ДНК очищали от белковых примесей и РНК с помощью гидроксиапатита (Ленинград).Спектральные характеристики ДНК получали на спектрофотометре СФ-26 («ЛОМО», СССР) и UV-VIS («Carl Zeiss», ГДР). Мутность образцов особо чистой ДНК определяли при помощи спектрофотометра Shimadzu-3000 («Shimadzu», Япония). В работе применяли образцы ДНК, выделенные из селезенки коровы различными способами и содержащие от 0,26 до 10 % белковых примесей.Ультрацентрифугирование растворов ДНК проводили в 0,005 M или 0,15 M NaCl (90 000 g, 30 мин) на центрифуге VAC-601 («Janetzki», ГДР) при концентрации ДНК 1 мг/мл. Для электронно-микроскопических исследований использовали метод белковой пленки [II] (JEM-ilOOO; «JEOL», Япония), ускоряющее напряжение 80 кВ.Плавление ДНК осуществляли в термостатированной ячейке собственной конструкции на спектрофотометре СФ-26. Все образцы содержали 2· IO -4 M натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты. Точность измерения температуры 0,05 °С. Скорость нагрева 0,5 град/мин. Качественный состав белков осадка определяли электрофорезом в 18 %-ном гюлиакриламидном геле в присутствии DS-Na [2]. В качестве маркеров использовали химотрипсиноген (27 000), яичный альбумин (45 000), БСА (67 000). Окрашивание проводилось кумасси G-250.Светорассеяние в области поглощения ДНК оценивали с помощью известной линейной зависимости логарифма оптической плотности (D) от логарифма длины волны (λ) : IgD = A-η·ΐ£λ, где величина η определяется размером частиц. По значению η вычисляли также размеры агрегатов, образующих комплекс ДНК с примесными белками [3,4].Для повышения точности определения содержания белковых примесей в ДНК модифицировали метод Лоури и др. [5]. Использовали...