Objective of the study was to develop enzyme-immunoassay test-kit for the detection of Bacillus anthracis spores. Materials and methods. Microbial cultures from the State Collection of Microorganisms at the premises of Affiliated Branch of the «48th Central Research Institute» of the Ministry of Defense of the Russian Federation and BALB/c mice were used in the research. Hybridization of B-lymphocytes with SP2/0-Ag14 myeloma cells was performed according to G. Kohler and C. Milstein procedure in De St. Fazekas and P. Scheidegger modification. Hybridomas were cultured in the peritoneal cavity of BALB/c mice. Ascitic fluids were isolated from mice, precipitated with ammonium sulfate and purified by means of ion-exchange chromatography for preparation of monoclonal antibodies. Specific activity of hybridoma’s supernatants, ascitic fluids, purified monoclonal antibodies was studied by «sandwich» ELISA. Specific components of test-kit were lyophilized in suitable cryoprotective medium. Results and conclusions.We have obtained new hybrid cell lines producing specific monoclonal antibodies against Bacillus anthracisspore antigens and ascitic fluids from which immunoglobulins were isolated. Optimum combinations of monoclonal antibodies as a sensitizer and a component of immunoperoxidase conjugates have been selected. Monoclonal antibodies 272E10G1-272F7A10 provide the highest sensitivity of ELISA for the detection of anthrax microbe spore antigens. Our enzyme-immunoassay test allows for identification of Bacillus anthracis spores in concentrations up to 5,0·105 spores per milliliter. No cross reaction with closely related saprophytes and other heterologous microorganisms in concentrations of 1,0·108 CFU per milliliter is observed.

В.Ю. охапкина, н.В. Пяткова, Г.В. барамзина, о.о. фоменков, а.к. федотов опЫт длительного хранения штаммов воЗБудителя туляремии Филиал ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации, Киров, Российская Федерация поддержание микроорганизмов в жизнеспособном состоянии при сохранении исходных практически важных свойств является важнейшей проблемой микробиологии. целью настоящих исследований стало изучение сохранности основных биологических свойств лиофилизированных культур 18 штаммов разных подвидов возбудителя туляремии из коллекции микробных культур филиала Фгбу «48 цнии» минобороны россии (г. киров) с различными условиями предварительной подготовки (с анимализацией через организм морских свинок и без нее). сроки хранения микробов при отрицательных температурах составили от 5 до 50 лет. материалы и методы. в соответствии с общепринятыми методиками определялась выживаемость микробов в процессе высушивания и последующего хранения, оценивались и сравнивались с паспортными данными морфологические, культуральные, биохимические, антигенные, патогенные свойства культур штаммов F. tularensis с различными сроками хранения и условиями подготовки к лиофилизации. результаты и обсуждение. проведенные исследования показали, что, при условии предварительной стабилизации свойств штаммов возбудителя туляремии методом анимализации, хранение в лиофилизированном состоянии при отрицательных температурах под вакуумом продолжительностью до 50 лет практически в полной мере предохраняет их от изменения фенотипических свойств. в то же время после лиофилизации многократно субкультивированных на плотных питательных средах культур без признаков исходного нарушения свойств обнаруживались явления диссоциации, снижение титров культур в реакции агглютинации от 2 до 4 раз, повышение на порядок величин показателя лд 50 .