В черте города Москвы из фекалий диких водоплавающих птиц изолировали 42 штамма вируса гриппа птиц и проанализировали их на микрочипах «Биогрипп», которые содержат 176 зондов к различным участкам генома вирусов гриппа. Микрочип позволяет определять: 1) субтип поверхностных белков гемагглютинина и нейраминидазы; 2) структуру С-концевой последовательности вирусного белка NS1, влияющую на степень ингибирования транскрипции клеточных хозяйских генов, в том числе ответственных за синтез интерферона; 3) наличие стоп-кодонов и мутацию N66S в рамке считывания вирусного белка PB1-F2, 4) наличие полиосновного сайта протеолитического расщепления гемагглютинина. Среди изолятов от диких птиц идентифицированы вирусы гриппа субтипов H3N1, H3N6, H3N8, H4N6, H1N1, H5N3 и H11N9. Все они содержали последовательность ESEV на С-конце белка NS1, полноразмерную рамку считывания для белка PB1-F2. Замена N66S в PB1-F2 обнаружена у шести штаммов. Однако такие маркеры патогенности, как последовательность ESEV (лиганд PDZ-домена) в вирусном белке NS1 и замена N66S PB1-F2 в контексте генома вирусов гриппа диких уток, не делали вирус патогенным для мышей. Все изоляты были высокоурожайны в куриных эмбрионах, инфекционны и иммуногенны для мышей, но не вызывали у этих животных клинических симптомов заболевания.

No abstract

No abstract

The change in the phenotypic properties resulting from amino acid substitutions in the hemagglutinin (HA) molecule is an important link in the evolutionary process of influenza viruses. It is believed to be one of the mechanisms of the emergence of highly pathogenic strains of influenza A viruses, including subtype H5N1. Using the site-directed mutagenesis, we introduced mutations in the HA gene of the H5N1 subtype of influenza A virus. The obtained virus variants were analyzed and compared using the following parameters: optimal pH of conformational transition (according to the results of the hemolysis test), specificity of receptor binding (using a set of synthetic analogues of cell surface sialooligosaccharides), thermoresistance (heat-dependent reduction of hemagglutinin activity), virulence in mice, and the kinetics of replication in chicken embryos, and reproductive activity at different temperatures (RCT-based). N186I and N186T mutations in the HA protein increased the virulence of the original virus in mice. These mutations accelerated virus replication in the early stages of infection in chicken embryos and increased the level of replication at late stages. In addition, compared to the original virus, the mutant variants replicated more efficiently at lower temperatures. The obtained data clearly prove the effect of amino acid substitutions at the 186 position of HA on phenotypic properties of the H5N1 subtype of influenza A.