The molecular mechanisms involved in the development of a high level of resistance to a wide range of antimicrobials in Burkholderia pseudomallei and closely related species have not been sufficiently investigated. In the present study, the properties of B. pseudomallei, B. mallei and B. thailandensis mutants with increased resistance to fluoroquinolones and cephalosporins were analysed. Resistance to pefloxacin, ofloxacin and ceftazidime in B. pseudomallei and B. thailandensis was accompanied by an increased resistance to aminoglycosides, beta-lactams, macrolides and chloramphenicol, whereas mutants of B. mallei were characterized by a narrower spectrum of resistance. With the use of the differential display technique, we demonstrated that multiple resistant variants of B. pseudomallei, B. mallei and B. thailandensis had an increased expression of putative efflux transporters belonging to the resistance-nodulation division superfamily and the major facilitator superfamily. With the application of PCR-single-stranded conformational polymorphism (PCR-SSCP) and sequencing, point mutations in gyrA quinolone-resistance determining region were detected in the part of multiple resistant B. pseudomallei and B. mallei mutants. These results indicate that various molecular mechanisms are involved in the development of multiple drug resistance in pathogenic Burkholderia and may be useful for further studying the adaptability of this microorganism and optimization of treatment.

Aim. Determine an optimal set of the most effective methods of identification and intraspecies typing of causative agents of glanders and melioidosis. Materials and methods. Bacteriologic, immunochemical, molecular-genetic methods were used. Results. A possibility to identify collection strains of pathogenic and closely related Burkholderia in semiautomatic systems is studied. Means of detection of informative variable genome segments of the specified microorganisms were developed, methods of their genetic typing were selected. Effectiveness of application of precipitating mAbs for differentiation of Burkholderia was established. Data on diagnostic possibilities of immunoglobulins fluorescing based on monoclonal antibodies of various etiotropic directionality for detection and identification of B. mallei and B. pseudomallei are generalized. Experimental series of amplification test-systems for identification of glanders and melioidosis causative agents in real-time PCR format are created. Conclusion. A number of methods for identification and typing of glanders and melioidosis causative agents is proposed.

The review reflects the current state of the working in collection and presents the directions of its improvement within the framework of the carried out certification of the collection of pathogenic Burkholderia spp. of Volgograd Research Institute for Plague Control. The ways of modernization of existing methods of conservation, optimization of modern methods of phenotypic and molecular-genetic characteristics of strains of pathogenic microorganisms are considered, and an information cataloging system with the formation of a universal database is proposed.

Burkholderia pseudomallei и Burkholderia mallei являются возбудителями мелиоидоза и сапа -опасных инфекционных заболеваний. Данные микроорганизмы не эндемичны для РФ, однако не исключена возможность завозного случая или преднамеренного их использования в качестве агентов биологического оружия. В практической работе для ускоренного выявления и последующей идентификации патогенных микроорганизмов чаще всего используют метод ориентировочной реакции агглютинации как наиболее простой, не требующий дополнительного оборудования и достаточно легкий в выполнении. Поскольку в России стандартные (производственные) диагностические видоспецифические сыворотки ни для одного вида буркхольдерий не выпускаются, в условиях специализированных лабораторий для постановки диагностических иммунологических реакций используют экспериментальные серии препаратов. В настоящей работе мы исследовали четыре вида экспериментальной кроличьей иммунной сыворотки с использованием штаммов возбудителей мелиоидоза и сапа коллекции ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора. Наиболее активной оказалась сыворотка, полученная против живых клеток B. pseudomallei VPA, наименее -сыворотка против B. pseudomallei С-141; с комплексной сывороткой против клеток 5 штаммов Burkholderia thailandensis и с сывороткой против экстрацеллюлярного антигена B. thailandensis 264 агглютинация наблюдалась только в низких разведениях.

оСоБенноСти идентифиКации Burkholderia mallei и Burkholderia pseudomallei С ПоМощьЮ МиКроБиологичеСКого анализатора VItek 2 COMPACt 30 ФКУЗ «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт», Волгоград, Российская Федерация для идентификации B. pseudomallei и B. mallei в лабораторной практике широко применяется автоматизированная система Vitek 2, основанная на сравнении биохимического профиля исследуемой бактериальной культуры с имеющейся базой данных. цель работы. проведение расширенной фенотипической характеристики штаммов возбудителей сапа и мелиоидоза, поддерживаемых в коллекции Фкуз «волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» и анализа вариаций их биохимических профилей с использованием системы Vitek 2. материалы и методы. с помощью Vitek 2 (bioMerieux, Франция) проанализированы биохимические свойства 52 коллекционных штаммов B. pseudomallei и B. mallei, выращенных на L-агаре (Difco, сШа) и триптиказо-соевом агаретса (HiMedia, индия). Выводы и результаты. большинство исследованных штаммов (31 из 40 B. pseudomallei и 8 из 12 B. mallei) идентифицированы с приемлемой для определения видовой принадлежности вероятностью (90-99 %). процент правильной идентификации B. pseudomallei и B. mallei был выше при культивировании на L-агаре, чем на тса. в связи с вариабельностью биохимических признаков, отдельные штаммы показали нетипичные для своего вида результаты по определенным тестам (для штаммов B. pseudomallei-отсутствие активности β-N-ацетилглюкозаминидазы, β-Nацетилгалактозаминидазы и способность к утилизации D-целлобиозы; для штаммов B. mallei-отсутствие активности L-пролинариламидазы и тирозинариламидазы, наличие активности глицинариламидазы, способность к утилизации сахарозы и D-трегалозы), что привело к их неправильной идентификации. вероятность ошибочной диагностики микроорганизмов рода Burkholderia диктует необходимость дополнения идентификационной базы бактериологического анализатора Vitek 2 данными по биохимическим характеристикам штаммов, имеющих особенности в профиле.