Blastocoel fluid displays high levels of mosaicism and has low karyotype concordance between the embryo inner cell mass and trophectoderm, making it unsuitable for diagnostic purposes.

Сравнительное молекулярное кариотипирование внеклеточной ДНК из внутриполостной жидкости бластоцисты, а также эмбриобласта и трофэктодермы позволило получить свидетельства в пользу наличия механизмов самокоррекции эмбрионального кариотипа на преимплантационном этапе развития человека. Comparative molecular karyotyping of cell-free DNA from the blastocoele fluid of the blastocyst and the embryoblast and trophectoderm, allowed us to obtain evidence for the presence of mechanisms of self-correction of the embryonic karyotype at the preimplantation stage of human development.

В рамках подготовительных этапов преимплантационного тестирования 9 моногенных заболеваний (ПГT-М) методом гнездовой ПЦР проанализированы 144 локуса (STR и патогенные варианты)109 единичных клеток и 24 образцов продуктов полногеномной амплификации (ПГА) нескольких клеток. Pre-examination single cell validation was performed for preimplantation genetic testing (PGT-M) for 9 monogenic disorders by nested PCR for STR and pathogenic variants. Totally 109 single cells and 24 WGA products (by MDA) were analyzed.

Актуальность: Ограниченный репродуктивный потенциал у человека и прогрессирующее ухудшение репродуктивного здоровья населения стали причиной развития вспомогательных репродуктивных технологий в последние десятилетия. С целью повышения вероятности имплантации бластоцисты, снижения частоты спонтанных абортов у семейных пар, которые имеют проблемы репродукции, в клиническую практику был введен преимплантационный генетический скрининг (ПГС). Культивирование эмбрионов человека in vitro в циклах экстракорпорального оплодотворении (ЭКО), а также возможность получения генетического материала при проведении ПГС позволяют оценить частоту и спектр хромосомных нарушений в бластоцистах человека. Цель: Анализ частоты и спектра числовых хромосомных аномалий в бластоцистах, полученных в рамках циклов ЭКО-ПГС. Материалы и методы. Проведен ретроспективный анализ молекулярных кариотипов 113 бластоцист, полученных в рамках циклов ЭКО-ПГС от 47 женщин. Полногеномная амплификация (ПГА) ДНК из клеток трофэктодермы проводилась с использованием набора реактивов PicoPlex (Rubicon Genomics, США). Анализ образцов ДНК, полученных после ПГА, был проведен методом микроматричной сравнительной геномной гибридизации (aCGH) с использованием микрочипа GenetiSure Pre-Screen, 8×60K (Agilent Technologies, США). Результаты: Эффективность ПГА составила 97,3% (110/113). Сбалансированный кариотип был установлен в 31% (34/110) бластоцист. Частота бластоцист с хромосомным дисбалансом в группе женщин моложе 35 лет оказалась значимо ниже (46,9 %) по сравнению с частотой бластоцист с хромосомным дисбалансом в группе женщин старше 35 лет (81,0 %) (р < 0,001). Хромосомные аномалии были представлены анеуплоидиями (74 %), в 26 % - структурными нарушениями хромосом. Распределение анеуплоидий имело следующую структуру: трисомии аутосом составили 41 %, моносомии аутосом - 48 %, анеуплоидии половых хромосом - 7%, тетрасомии аутосом - 3 %, нуллисомии аутосом - 1 %. Наиболее часто отмечались анеуплоидии хромосом 5, 15, 16, 17, 19, 21 и 22. Выводы: Анализ хромосомных аберраций в бластоцистах продемонстрировал высокую частоту хромосомного дисбаланса (69%) и широкий спектр как числовых, так и структурных нарушений хромосом. ПГС методом aCGH позволяет отобрать бластоцисты со сбалансированным набором хромосом. По результатам переносов бластоцист в циклах ЭКО-ПГС клиническая беременность наступила в 32% случаев. Introduction: Limited reproductive potential in humans and the progressive decline of the reproductive health of the population have led to the development of assisted reproductive technologies in recent decades. In order to improve pregnancy rates in couples with reproduction problems, preimplantation genetic screening was introduced into clinical practice. Cultivation of human embryos in vitro in in vitro fertilization cycles (IVF), as well as the possibility of obtaining genetic material during preimplantation genetic screening and diagnosis (PGS / PGD), allow us to estimate the frequency and spectrum of chromosomal abnormalities in human blastocysts. Aim: Analysis of the rate and spectrum of aneuploidies in human blastocysts obtained in the IVF-PGD cycles. Material and methods: A retrospective analysis of the molecular karyotypes of 113 blastocysts obtained in the cycles of assisted reproductive technology IVF-PGD from 47 women was carried out. The whole genomic amplification of DNA from trophectoderm cells was performed using the PicoPlex reagent kit (Rubicon Genomics, USA). Analysis of DNA samples obtained after whole genome amplification was carried out by array comparative genomic hybridization (aCGH) using a GenetiSure Pre-Screen microchip, 8×60K (Agilent Technologies, USA). Results: The efficiency of whole genome amplification was 97.3% (110/113). A balanced karyotype was established in 31% (34/110) blastocysts. The rate of a blastocyst with chromosomal imbalance in the group of women under 35 years old was lower (46.9%) compared to the rate of blastocyst with chromosomal imbalance in the group of women over 35 years old (81.0%) (p < 0.001). 74% of the identified chromosomal abnormalities were aneuploidy, 26% - structural chromosomal abberations. The distribution of aneuploidies had the following structure: autosomal trisomies (41%), autosomal monosomies (48%), aneuploidies of sex chromosomes (7%), autosomal tetrasomies (3%), autosomal nullisomies (1%). Aneuploidies of chromosomes 5, 15, 16, 17, 19, 21 and 22 were noted with the greatest frequency. Conclusions: Analysis of chromosomal aberrations in human embryos at the blastocyst stage showed a high frequency of chromosomal imbalance (69%) and a wide range of both numerical and structural abnormalities of chromosomes. PGS with aCGH allows the selection of blastocysts with a balanced karyotype. According to the results of blastocyst transfers in IVF-PGD cycles, clinical pregnancy occurred in 32 % of cases.

No abstract