Введение. Проявление цитотоксичного влияния клинических штаммов бактерий на культуру фибробластов, по данным ряда авторов, отражает патогенный потенциал микробиоты, расцениваемый как фактор риска развития осложнений, сопровождающихся снижением функциональной активности или гибелью клеток. Наличие в хронической ране бактерий – продуцентов биопленки, обладающих цитотоксичностью, способно пролонгировать фазу воспаления, что определяет показания к использованию эффективных методов обработки раны.Цель. Установить критерии оценки цитотоксичности матрикса бактериальной биопленки по ассоциированному с этиологической структурой микробиоты эффекту влияния биопленки на культуру фибробластов и развитие процесса воспаления.Материалы и методы. Проведена оценка цитотоксического влияния компонентов матрикса биопленки бактерий, выделенных из ран, на культуру фибробластов кожи на основании использования методов исследования жизнеспособности (количества поврежденных клеток по результатам ЛДГ-теста, количества CD95+ и 7-AAD+ клеток), пролиферативной активности (времени удвоения, индекса пролиферации), а так-же экспрессии поверхностных иммунофенотипических маркеров: эластазы (CD10), рецептора гиалуроновой кислоты и матриксных металлопротеиназ (CD44), экто-5’-нуклеотидазы (CD73), рецептора коллагена (CD49b/CD29), регулятора адгезии и миграции (CD90), корецептора для трансформирующего фактора роста (CD105), виментина (методом проточной цитофлуориметрии).Результаты. Для первичных культур фибробластов грануляционной ткани острыхран был характерен более высокий уровень экспрессии основных маркеров, отражающих иммунофенотип фибробластов, – CD44, CD90, CD73, CD10 CD49b/CD29 (более 60–80% клеток), и более низкие значения 7-AAD+ и CD95+клеток (менее 22%), чем таковые для фибробластов хронических ран, колонизированных бактериями – продуцентами биопленки. Показатели отражают нарушение состояния фибробластов в процессе хронизации воспаления и могут быть рекомендованы в качестве критериев дифференциальной диагностики острой и хронической раны с целью обоснования соответствующей лечебной тактики. Бактериальные компоненты матрикса биопленки P. aeruginosa, K. pneumoniae, S. aureus, E. faecalis проявляли цитотоксичное влияние на культуру фибробластов здоровой кожи в эксперименте, что выражалось в изменении показателей пролиферативной активности (времени удвоения, индекса пролиферации, количества поврежденных клеток по результатам ЛДГ-теста), нарушении экспрессии на фибробластах CD10 (маркер эластазы), CD44 (рецептор для гиалуроновой кислоты, коллагена и матриксных металлопротеиназ), CD73 (экто-5’-нуклеотидаза), CD90 (регулятор адгезии, миграции фибробластов и организации их цитоскелета), CD49b/CD29 (α2β1-интегрин – рецептор коллагена), развитии апоптоза (по CD95) и гибели (по 7-AAD) фибробластов. Для практического использования лабораторного метода оценки состояния фибробластов, испытывающих на себе влияние компонентов бактериальной биопленки, разработана таблица интерпретации результатов исследования, в которой проявление цитотоксичности выражается в % от показателей контрольной пробы. Метод отражен в инструкции по применению «Метод определения фазы раневого процесса хронической язвы кожи», которая утверждена Министерством здравоохранения Республики Беларусь 16.12.2020, рег. № 127-1220.Выводы. Результаты дополнительно подтверждают вклад микробного фактора в патогенез нарушения репарации и формирования длительно не заживающей раны. Проявление цитотоксичности бактерий, выделенных из хронической раны на культуру аутологичных фибробластов, обосновывает патогенный потенциал микробиоты в плане риска развития осложнений, обусловленных биомедицинским продуктом, – снижения функциональной активности или гибели клеток. Наличие в хронической ране бактерий – продуцентов биопленки, обладающих цитотоксичностью, является критерием пролонгации фазы воспаления и определяет показания к использованию эффективных методов обработки раны для стимуляции перехода фазы воспаления в фазу регенерации. Introduction. The manifestation of the cytotoxic effect of clinical strains of bacteria on the culture of fibroblasts, according to a number of authors, reflects the pathogenic potential of the microbiota, regarded as a risk factor for the development of complications accompanied by a decrease in functional activity or cell death. The presence of biofilm- producing bacteria with cytotoxicity in a chronic wound can prolong the inflammation phase, which determines the indications for the use of effective methods of wound debridement.Purpose. To establish criteria for assessing the cytotoxicity of the bacterial biofilm matrix according to the effect of its influence on the fibroblast culture and the development of the inflammation process associated with the etiological structure of the microbiota.Materials and methods. The cytotoxic effect of the components of the biofilm matrix of bacteria isolated from wounds on the skin fibroblast culture was assessed based on the use of methods for studying viability (the number of damaged cells according to the results of the LDH test, the number of CD95+ and 7-AAD+ cells), proliferative activity (doubling time, proliferation index ), as well as the expression of surface immunophenotypic markers: elastase (CD10), hyaluronic acid receptor and matrix metalloproteinases (CD44), 5’-ecto-nucleotidase (CD73), collagen receptor (CD49b/CD29), adhesion and migration regulator (CD90), co -receptor for transforming growth factor (CD105), vimentin (by flow cytometry).Results. Primary cultures of fibroblasts from the granulation tissue of acute wounds were characterized by a higher level of expression of CD44, CD90, CD73, CD10 CD49b/CD29 (more than 60–80% of cells) and lower values of 7-AAD+ and CD95+ cells (less than 22%) than for chronic wound fibroblasts colonized by biofilm-producing bacteria. The indicators reflect the violation of the state of fibroblasts in the process of chronic inflammation and can be recommended as criteria for the differential diagnosis of acute and chronic wounds in order to justify the appropriate treatment tactics. Components of the biofilm matrix P. aeruginosa, K. pneumoniae, S. aureus, E. faecalis showed cytotoxicity on healthy skin fibroblast culture in the experiment, which was expressed in a change in proliferative activity indicators (doubling time, proliferation index, number of damaged cells according to the results of the LDH test), impaired expression on fibroblasts of the main markers (CD10, CD44, CD73, CD90, CD49b/CD29), development of apoptosis (according to CD95) and death (according to 7-AAD) of fibroblasts. For the practical use of the laboratory method for assessing the state of fibroblasts under the influence of bacterial biofilm components, a table for interpreting the results of the study was developed, in which the manifestation of cytotoxicity is expressed as % of the control. The method is reflected in the instructions for use "Method for determining the phase of the wound process of chronic skin ulcers", which was approved by the Ministry of Health of the Republic of Belarus on December 16, 2020, reg. No. 127-1220.Conclusions. The results additionally confirm the contribution of the microbial factor to the pathogenesis of repair disorders and the formation of a long-term non-healing wound. The manifestation of cytotoxicity of bacteria isolated from a chronic wound on a culture of autologous fibroblasts substantiates the pathogenic potential of the microbiota in terms of the risk of developing complications associated with a biomedical product - a decrease in functional activity or cell death. The presence of biofilm-producing bacteria with cytotoxicity in a chronic wound is a criterion for the prolongation of the inflammation phase and determines the indications for the use of effective debridement methods to stimulate the transition of the inflammation to the regeneration phase.

Острый лейкоз (ОЛ) является самой распространенной опухолью кроветворной ткани в детском возрасте. Исследование иммунофенотипа бластных клеток позволяет не только определить линейную принадлежность опухолевых клеток и выявить иммунологический вариант ОЛ, но и мониторировать результаты терапии, подтверждать рецидивы. Современная иммунологическая классификация предполагает использование стандартизованной панели моноклональных антител, что позволяет определить происхождение бластных клеток более чем в 98% случаев ОЛ. Цель. Оценить иммунологический фенотип острого лейкоза у детей в Гомельской области. Материалы и методы. Использованы образцы костного мозга 57 пациентов. Исследование выполнялось на проточном цитофлюориметре FACS Canto II. Для определения линейной принадлежности опухолевых клеток использовалась скрининговая панель моноклональных антител. В последующем выполнялась постановка диагностической панели. Результаты. Диагноз ОЛ был установлен у 57 пациентов (35 мальчиков и 22 девочки). Частота ОЛЛ составила 89% (n=51), ОМЛ – 11% (n=6). Большинство ОЛЛ были представлены В-клеточными вариантами (92%, n=47), Т-клеточные варианты встречались в 8% случаев (n=4). Случаи В-ОЛЛ включали: BI – 1 (2%), BII – 41 (88%), BIII – 4 (8%), BIV – 1 (2%, n=1). В группе В-ОЛЛ аберрантность выявлена у 22 пациентов (47%) и включала коэкспрессию CD123, CD13, CD25, CD33, CD65, cyMPO, NG2. Для ОМЛ аберрантность характеризовалась экспрессией CD2, CD7, CD4, NG2, CD25. Среди 4 случаев Т-ОЛЛ аберрантность установлена у 3 пациентов в виде экспрессии CD10, CD33. Заключение. Полученные данные о частоте встречаемости ОМЛ и ОЛЛ у детей в Гомельской области совпадают с данными литературы. Частота встречаемости ОЛ у детей до 5 лет выше, чем в других возрастных группах, при этом среди вариантов ОЛ чаще встречается BII-ОЛЛ. В значительной части случаев В-ОЛЛ опухоль имеет аберрантный фенотип с коэкспрессией маркеров других клеточных линий. Acute leukemia (AL) is the most common hematopoietic tissue tumor in childhood. The study of the immunophenotype of blast cells allows not only to determine the linear affiliation of tumor cells and identify the immunological variant of AL, but also to monitor the results of therapy, confirmrelapses. Modern immunological classification involves the use of a standardized panel of monoclonal antibodies, which makes it possible to determine the origin of blast cells in more than 98% of AL cases. Purpose. To evaluate the immunological phenotype of acute leukemia in children in the Gomel region. Materials and methods. Bone marrow samples from 57 patients were used. The study was performed on a FACS Canto II flow cytometer. To determine the linearity of tumor cells, a screening panel of monoclonal antibodies was used. Subsequently, the diagnostic panel was installed. Results. AL was diagnosed in 57 patients (35 boys and 22 girls). The frequency of ALL was 89% (n=51), AML – 11% (n=6). The majority of ALL were represented by B-cell variants (92%, n=47), T-cell variants occurred in 8% of cases (n=4). B-ALL cases included: BI – 1 (2%), BII – 41 (88%), BIII – 4 (8%), BIV – 1 (2%, n=1). In the B-ALL group, aberrations were detected in 22 patients (47%) and included co-expression of CD123, CD13, CD25, CD33, CD65, cyMPO, NG2. For AML, aberration was characterized by the expression of CD2, CD7, CD4, NG2, CD25. Among 4 cases of T-ALL, aberration was found in 3 patients in the form of expression of CD10, CD33. Conclusion. The obtained data on the incidence of AML and ALL in children in the Gomel region coincide with the literature data. The incidence of AL in children under 5 years of age is higher than in other age groups, while BII-ALL is more common among AL variants. In a significant proportion of B-ALL cases, the tumor has an aberrant phenotype with co- expression of markers from other cell lines.

Цель. Осуществить иммуногистохимические исследования факторов клеточного иммунитета в биоптатах острых и хронических ран с учетом клинико-микробиологических характеристик раневой поверхности. Материалы и методы. Выполнен анализ относительного содержания (%) CD3+ (Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хелперы) и CD8+ (Т-цитотоксические лимфоциты), CD20+ (В-лимфоциты), CD138+ (плазмоциты), CD68+ (макрофаги), CD15+ (нейтрофилы), CD34+ (эндотелий сосудов), CD57+ (натуральные киллеры), d2-40 (лимфатический эндотелий), Ki 67+ (маркер пролиферации), каспаза 3+ (маркер апоптоза), S100 (маркер воспаления), COX-2 (маркер воспаления) клеток по результатам иммуногистохимического исследования биоптатов грануляционной ткани пациентов с острыми ранами (ОР, n=30, срок раны от 5 до 21 суток) и хроническими ранами (ХР, n=120, срок раны более 3 недель). Оценивали также клинический статус раны на предмет наличия признаков воспаления и выполняли микробиологический посев раневого отделяемого. Результаты. Более высокие значения иммунорегуляторного индекса (отношение CD4+/CD8+) и маркера пролиферации Ki 67+ регистрировались в острых ранах сроком от 5 до 21 суток, более низкие – в хронических ранах сроком более 22 суток и существенно не изменялись в зависимости от клинико-микробиологического состояния ран. Дополнительным признаком локального иммунного ответа являлось количество нейтрофилов, преобладающее в хронических ранах. Воспалительный статус ран и присутствие микроорганизмов, переход от стадии колонизации к стадии критической колонизации и инфекции характеризовались увеличением относительного содержания в ранах Т-лимфоцитов и их основных субпопуляций (CD4+ и CD8+ клеток), В-лимфоцитов, нейтрофилов и макрофагов, более высокими значениями S100 и COX-2. При выделении из хронических ран монокультур S. aureus в биоптатах в меньшем количестве обнаруживались В-лимфоциты, натуральные киллеры и макрофаги по сравнению с их содержанием в ранах, в которых этиологическими факторами инфекционного процесса были P. aeruginosa и A. baumannii. Выводы. Определение клеточных факторов локального иммунитета является перспективным направлением для дифференциальной диагностики острой и хронической раны, а особенности их изменения позволяют установить стадию инфекционного процесса. Purpose. To analyze the results of immunohistochemical studies of biopsy specimens from acute and chronic wounds taking into account their clinical and microbiological characteristics. Materials and methods. The relative content (%) of CD3+ (T-lymphocytes), CD4+ (T-helpers) and CD8+ (T-cytotoxic lymphocytes), CD20+ (B-lymphocytes), CD138+ (plasmocytes), CD68+(macrophages), CD15+(neutrophils), CD34+(vascularendothelium), CD57+ (natural killer cells), d2-40 (lymphatic endothelium), Ki 67+ (proliferation marker), caspase 3+ (apoptosis marker), S100 (inflammatory marker), COX-2 (inflammatory marker) cells was analyzed according to the results of immunohistochemical study of granulation tissue biopsy specimens from patients with acute wounds (n=30, wound duration from 5 to 21 days) and chronic wounds (n=120, wound duration more than 3 weeks). The clinical status of the wound was also assessed for signs of inflammation, and microbiological culture of wound swabs was performed. Results. Higher values of the immunoregulatory index (the ratio of CD4+/CD8+ lymphocytes) and the proliferation marker Ki 67 were recorded in acute wounds for a period of 5 to 21 days, lower values – in chronic wounds for a period of more than 22 days, and did not significantly change depending on the clinical and microbiological state of wounds. An additional feature was the number of neutrophils predominating in chronic wounds. The inflammatory status of wounds and the presence of microorganisms, as well as switch from colonisation stage to critical colonisation and infection stage were characterised by an increase in T-lymphocytes relative content and their major subpopulations (CD4+ and CD8+ cells), B-lymphocytes, neutrophils and macrophages, higher values of S100 and COX-2 in wounds. When S. aureus monocultures were isolated from chronic wounds, B-lymphocytes, natural killer cells and macrophages were lower in biopsy specimens compared to their content in wounds in which P. aeruginosa and A. baumannii were etiologic factors of the infectious process. Conclusions. Immunohistochemical cell markers are promising objective criteria for differential diagnosis of acute and chronic wounds, allowing to establish the infectious process stage.

Objective: to analyze the clinical characteristics of the course of the disease in patients with neuroischaemic diabetic foot depending on the presence of bacterial monocultures and associations in wounds.Material and methods. We have performed a comparative analysis of the parameters of the clinical course of the disease and the condition of patients’ wounds (n = 76) depending on the presence of monocultures (group 1, n = 32) and microbial associations (n = 42). The list of the compared parameters in the groups included the duration of diabetes, number of hospitalizations per year, achievement of target HbA1c levels (<7.5 %), condition of granulation tissue of wounds.Results. With increased duration of the course of diabetes (from 5 to 15 years), higher number of hospitalizations per year, deteriorated carbohydrate metabolism (HbA1c> 7.5%) in combination with clinical signs of the initial stages of wound infection, the frequency rate of the detection of mixed bacterial cultures increased.Conclusion. The work has found differences in the duration of the course of diabetes, the number of hospitalizations per year, local status of wounds in the patients, as well as the frequency of achieving the target levels of HbA1с <7.5 %, depending on the severity of microbial load.

Recently, inflammatory and regulatory mechanisms that are involved in the onset and progression of angiopathies in diabetes mellitus (DM), including diabetic kidney disease (DKD), have been studied. In this study, we assessed the levels of fibroblast growth factor-23 (FGF-23) and inflammatory markers in patients with type 2 DM and different stages of chronic kidney disease (CKD). We investigated 64 patients with type 2 DM aged 34-84 years. The results showed significant changes in the levels of FGF-23, tumour necrosis factor alpha (TNF-alpha), C-reactive protein (CRP), high-sensitivity C-reactive protein (hsCRP), and interleukin-6 (IL-6) with the progression of CKD in patients with type 2 diabetes. Multiple regression analysis demonstrated the presence of an independent interconnection between serum levels of FGF-23 and creatinine.