Applications of RNA Interference in Ecdysone Research

Hannan, Garry N.; Hill, Ronald J.; Dedos, Skarlatos G.; Swevers, Luc; Iatrou, Kostas; Tan, Anjiang; Parthasarathy, R.; Bai, Hua; Zhang, Zhaolin; Palli, Subba Reddy

doi:10.1007/978-1-4020-9112-4_8

Cited by 4 publications

(4 citation statements)

References 78 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…This response is specific, since a high dose of a non-specific dsRNA (BmCAP-dsRNA) did not result in a decrease in luciferase activity. On the other hand, soaking of Bm5 cells with dsRNA in the extracellular medium at high concentration did not result in gene silencing ( Figure 3B , right panel) as was observed before [22] .…”

Section: Resultssupporting

confidence: 65%

“…In contrast to transfection, plain addition of dsRNA to the culture medium of Bm5 cells (“dsRNA soaking”) has no gene-silencing effect ( Figure 3B ; see also [22]), which has been also observed in other lepidopteran cell lines [37], [38]. This observation contrasts with that of Drosophila -derived S2 cells where efficient RNAi is achieved when cells are “soaked” at doses between 5–20 µg/ml of dsRNA in the extracellular medium [27].…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

See 1 more Smart Citation

Search for Limiting Factors in the RNAi Pathway in Silkmoth Tissues and the Bm5 Cell Line: The RNA-Binding Proteins R2D2 and Translin

et al. 2011

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

RNA interference (RNAi), an RNA-dependent gene silencing process that is initiated by double-stranded RNA (dsRNA) molecules, has been applied with variable success in lepidopteran insects, in contrast to the high efficiency achieved in the coleopteran Tribolium castaneum. To gain insight into the factors that determine the efficiency of RNAi, a survey was carried out to check the expression of factors that constitute the machinery of the small interfering RNA (siRNA) and microRNA (miRNA) pathways in different tissues and stages of the silkmoth, Bombyx mori. It was found that the dsRNA-binding protein R2D2, an essential component in the siRNA pathway in Drosophila, was expressed at minimal levels in silkmoth tissues. The silkmoth-derived Bm5 cell line was also deficient in expression of mRNA encoding full-length BmTranslin, an RNA-binding factor that has been shown to stimulate the efficiency of RNAi. However, despite the lack of expression of the RNA-binding proteins, silencing of a luciferase reporter gene was observed by co-transfection of luc dsRNA using a lipophilic reagent. In contrast, gene silencing was not detected when the cells were soaked in culture medium supplemented with dsRNA. The introduction of an expression construct for Tribolium R2D2 (TcR2D2) did not influence the potency of luc dsRNA to silence the luciferase reporter. Immunostaining experiments further showed that both TcR2D2 and BmTranslin accumulated at defined locations within the cytoplasm of transfected cells. Our results offer a first evaluation of the expression of the RNAi machinery in silkmoth tissues and Bm5 cells and provide evidence for a functional RNAi response to intracellular dsRNA in the absence of R2D2 and Translin. The failure of TcR2D2 to stimulate the intracellular RNAi pathway in Bombyx cells is discussed.

show abstract

Section: Resultssupporting

confidence: 65%

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Search for Limiting Factors in the RNAi Pathway in Silkmoth Tissues and the Bm5 Cell Line: The RNA-Binding Proteins R2D2 and Translin

et al. 2011

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…This cell line has been used to transfect heterologous EcR expression and EcRE-based reporter constructs to functionally characterize insect and even crustacean receptors (Swevers et al 1996 ;Kumar et al 2002 ;Verhaegen et al 2010 ) . Another strategy that has been explored is based on the knock-down of the endogenous receptor through RNAi (Hannan et al 2009 ) . Although these approaches can give good results, they still need to be watched with caution because of residual expression of endogenous receptors.…”

Section: Alternative Reporter Assaysmentioning

confidence: 99%

Cell-Based Screening Systems for Insecticides

Smagghe

Swevers

2012

Advanced Technologies for Managing Insect Pests

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

“…Κρίσιμες παραμέτρους συνιστούν, ακόμη, η ικανότητα πρόσληψης του dsRNA από το εξωκυττάριο μέσο, αλλά και η επιτυχής ενσωμάτωσή του στο μονοπάτι του RNAi μηχανισμού . Αν και έχει αποδειχθεί η ικανότητα ορισμένων κυτταροσειρών που προέρχονται από Λεπιδόπτερα έντομα να προσλαμβάνουν dsRNA από το εξωκυττάριο μέσο, όπως φαίνεται αυτό δεν αρκεί για να προκαλέσει αποσιώπηση ενός γονιδίου (Hannan et al, 2009;. Συνεπώς, για να είναι αποτελεσματικό το RNAi, η εσωτερίκευση του dsRNA από το κύτταρο θα πρέπει να συνοδεύεται και από την αποτελεσματική επαφή του με τους ενδοκυτταρικούς παράγοντες του RNAi μηχανισμού .…”

Section: οι μέθοδοι χορήγησης του Dsrnaunclassified

Μελέτη των μονοπατιών των μικρών μορίων RNA στο μεταξοσκώληκα (Bombyx mori)

Κολλιοπούλου¹

View full text Add to dashboard Cite

Η παρούσα Διδακτορική Διατριβή εστιάζει στη μελέτη των μονοπατιών των μικρών μορίων RNA στο μεταξοσκώληκα Bombyx mori, υπό το πρίσμα των παραγόντων που επηρεάζουν την αποδοτικότητα του RNAi μηχανισμού. Οι παράγοντες που εξετάστηκαν αφορούσαν κυρίως στην έκφραση γονιδίων-κλειδιών του RNAi μηχανισμού και στην ύπαρξη ιϊκής μόλυνσης (εμμένουσας ή παθογόνου), ενώ ακόμα έγιναν αναφορές στους μηχανισμούς της ενδογενούς φυσικής ανοσίας και της ικανότητας πρόσληψης dsRNA από το εξωκυττάριο μέσο. Από την ανάλυση των αποτελεσμάτων προέκυψαν σημαντικά συμπεράσματα σχετικά με την επίδραση των προαναφερθέντων παραγόντων στην αποδοτικότητα του μηχανισμού του RNAi στο μεταξοσκώληκα. Τα ευρήματά μας αποκαλύπτουν πιθανή αλληλοεπικάλυψη των βασικών μονοπατιών του RNAi στο μεταξοσκώληκα in vitro, κατά την πρόκληση γονιδιακής αποσιώπησης μέσω dsRNA (miRNA, siRNA και piRNA), ή μέσω φουρκέτας RNA (siRNA και piRNA). Επιπλέον, πέραν της εμπλοκής τους στο μηχανισμό γονιδιακής αποσιώπησης μέσω dsRNA, τα γονίδια BmDcr2 και BmAgo2 του μονοπατιού siRNA αναδεικνύονται ως καίριοι παράγοντες για το μεσέντερο του μεταξοσκώληκα, τόσο υπό φυσιολογικές συνθήκες, όσο και υπό συνθήκες ιϊκής μόλυνσης (BmCPV). Όμως, και το γονίδιο BmAgo3 του piRNA μονοπατιού φαίνεται να συνιστά σημαντικό παράγοντα που επηρεάζει την αποδοτικότητα του RNAi μηχανισμού στο μεταξοσκώληκα, ενώ μπορεί επίσης μαζί με τους παράγοντες BmR2D2 και BmTranslin2, και ενδεχομένως και τον BmAub, να διαδραματίσει κρίσιμο ρόλο για την αντιϊκή απόκριση (BmMLV και AcMNPV) στα Λεπιδόπτερα. Ακόμη, η παρουσία μίας εμμένουσας μόλυνσης δε φαίνεται να επιδρά αρνητικά στην αποδοτικότητα του RNAi μηχανισμού (BmMLV) και στην αντιϊκή προστασία του μεταξοσκώληκα (BmCPV). Τέλος, τα κλασσικά μονοπάτια της ενδογενούς φυσικής ανοσίας του B. mori δεν αποκρίνονται έντονα κατά τη διάρκεια της αντιϊκής προστασίας (BmCPV), και κατά συνέπεια δε φαίνεται να αλληλεπιδρούν σημαντικά με τον RNAi μηχανισμό, ούτως ώστε να επηρεάζουν την αποδοτικότητά του. Ωστόσο, από την παρούσα έρευνα αναδεικνύονται νέα γονίδια που ενδεχομένως διαθέτουν στρατηγικής σημασίας ρόλους για την αντιϊκή απόκριση του μεταξοσκώληκα σε συνδυασμό με τη δράση του RNAi μηχανισμού.

show abstract

Applications of RNA Interference in Ecdysone Research

Cited by 4 publications

References 78 publications

Search for Limiting Factors in the RNAi Pathway in Silkmoth Tissues and the Bm5 Cell Line: The RNA-Binding Proteins R2D2 and Translin

Search for Limiting Factors in the RNAi Pathway in Silkmoth Tissues and the Bm5 Cell Line: The RNA-Binding Proteins R2D2 and Translin

Cell-Based Screening Systems for Insecticides

Μελέτη των μονοπατιών των μικρών μορίων RNA στο μεταξοσκώληκα (Bombyx mori)

Contact Info

Product

Resources

About