Los avances científicos, tecnológicos y los modelos de desarrollo social y económico actuales ponen de manifiesto la influencia negativa del ser humano sobre el medio ambiente. La educación universitaria resulta indispensable para la difusión de conocimientos y promoción de comportamientos más solidarios y menos perjudiciales con el medio ambiente. La presente investigación tuvo como objetivo determinar la relación del conocimiento ambiental (CA) y el comportamiento proambiental (CPA) de estudiantes universitarios y su manifestación según las áreas de conocimiento, en una institución de educación superior en Colombia. Se realizó un estudio comparativo con diseño transversal, utilizando un muestreo dirigido, conformado por 991 estudiantes de diferentes carreras universitarias. Se aplicó el Índice de Comportamiento Proambiental (ICP) que evalúa creencias, normas subjetivas e intención de comportamiento proambiental y la Escala Diagnóstica de Conocimiento Ambiental para Latinoamérica (ECLA) que evalúa conocimiento del sistema, de las acciones, de la efectividad, y de problemas ambientales. Se evidenciaron asociaciones positivas y significativas entre el CA y las escalas del ICP; y se encontraron diferencias significativas según las diferentes áreas de conocimiento (p< .05). Los estudiantes de Ciencias Sociales y Humanas presentaron mayores puntajes en CA y CPA respecto a los de otras áreas. Se concluye que los estudiantes poseen creencias, actitudes y acciones positivas hacia el medioambiente, no obstante, su nivel de CA es bajo. Las universidades cuentan con el reto de promover una formación que impacte en el bienestar humano-ambiente.