Este estudo teve por objetivo desenvolver uma metodologia de multiplicação in vitro para Xylopia aromatica, visando a produção de mudas, avaliando-se meios de cultura e concentrações de reguladores de crescimento mais adequados. Foram utilizados, como explantes, segmentos nodais, provindos de brotações de mudas produzidas via seminal e mantidas em viveiro. Foram testados os meios de cultura Murashige Skoog (MS) e Wood Plant Medium (WPM) suplementados com 800 mg L-1 de polivinilpirrolidona (PVP), 30 g L-1 de sacarose, 0,054 µM de ácido naftalenoacético (ANA) e 6 g L-1 de ágar e concentrações de 2,22 e 3,55 µM de benzilaminopurina (BAP) para a multiplicação in vitro. Aos trinta dias, avaliou-se o número de brotações laterais emitidas e o percentual de explantes formando calos na base. As maiores taxas de multiplicação foram obtidas com o meio MS acrescido de 3,55 µM de BAP. Em relação à formação de calos na base dos explantes, o meio MS promoveu maior formação quando comparado ao WPM, no entanto não comprometeu a formação de brotos. Foi possível estabelecer as fases de introdução e multiplicação, definindo assim o meio de cultura e concentrações de reguladores de crescimento mais adequados ao cultivo in vitro de Xylopia aromatica.