Effects of 17β-Estradiol on Distribution of Pituitary Isoforms of Luteinizing Hormone and Follicle-Stimulating Hormone during the Follicular Phase of the Bovine Estrous Cycle1

Kojima, F. N.; Cupp, Andrea S.; Stumpf, T. T.; Zalesky, D. D.; Roberson, Mark S.; Werth, L. A.; Wolfe, Michael W.; Kittok, R. J.; Grotjan, H. Edward; Kinder, J. E.

doi:10.1095/biolreprod52.2.297

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“…Similar distribution patterns have been reported in ovine species (42) , and in the elution patterns of ovine (46) and bovine hypophysis extracts (11,47) . It can therefore be assumed that the procedure developed here to isolate isoform groups from bovine LH does not interfere in the isoform distribution patterns of bovine LH.…”

Section: Discussionsupporting

confidence: 84%

“…To date, the neutral isoform in LH from ruminants and other species has not been immunologically or biologically characterized, possibly because it is difficult to purify and characterize due to its low content in the adenohypophysis (13,40,41) and the blood (6) . The bioactivity recorded in the neutral isoform in the present study is a valuable addition to biological evaluation of the bovine LH isoform spectrum.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

“…Adicionalmente, hasta donde se sabe, la caracterización inmunológica y biológica para la isoforma de tipo neutro en rumiantes y otras especies no se ha reportado, debido posiblemente a su bajo contenido en la adenohipófisis (13,40,41) y en el suero (6) , lo que genera dificultad para su caracterización y purificación. Con el resultado pattern depended in the amount of assayed protein, exhibiting similar values between the slopes, indicating the proteins are analogous.…”

Section: Discussionunclassified

“…Este patrón de distribución resultó similar aunque no idéntico al observado en la especie ovina (42) , así como al patrón de elución que se observó durante el análisis de extractos hipofisarios ovinos (46) y bovinos (11,47) , en donde las isoformas aisladas de tipo básico predominaron. Por lo tanto, se puede asumir que el procedimiento desarrollado para la obtención del grupo de isoformas de la LH bovina no interfiere en el patrón particular de distribución de isoformas que muestra la LH en esta especie.…”

Section: Discussionunclassified

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Biological and immunological activity in bovine luteinizing hormone charge isoforms

Ortega¹,

Olivares

Murcia³

et al. 2016

Rev. Mex. Cienc. Pecu.

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RESUMENLa hormona luteinizante (LH) sufre modificaciones postraduccionales que dan origen a isoformas de carga. El estudio determinó la actividad biológica (B) e inmunológica (I) de distintas isoformas de LH bovina. Las isoformas se aislaron mediante el cromatoenfoque a partir del extracto glicoprotéico obtenido de lóbulos anteriores de hipófisis de bovino. La actividad biológica se evaluó en un bioensayo in vitro midiendo la producción de AMPc. La actividad inmunológica se midió con un radioinmunoensayo (RIA) específico para LH. El USDA-bLH-B5 se utilizó como referencia. Las isoformas se agruparon tomando como referencia el rango de pH de elución, en básicas (A, pH, 10.75-9.75; B, pH, 9.58-8.41), neutras (C, pH, 7.98-6.89) y ácidas (D, pH, 6.88-5.41; E, pH, 5.36-3.46). El peso molecular del heterodímero de cada isoforma y del estándar fue similar, estimado en 36.5 kDa. La actividad inmunológica y biológica se comportó de forma dosis-dependiente. Con respecto al estándar, se requirió una mayor concentración de proteína de cada isoforma para obtener el IC50 en la curva de inhibición. En el bioensayo, el valor EC50 para la producción de AMPc fue significativamente diferente entre isoformas; la isoforma neutra mostró un EC50 inferior lo que se interpretó como la proteína más bioactiva, en contraste, la isoforma ácida, mostró un valor de EC50 superior y resultó ser la menos bioactiva; la básica tuvo un comportamiento intermedio (P<0.05). En conclusión, los resultados sugieren un efecto diferenciado de las isoformas de carga, sobre la producción cuantitativa de AMPc por unidad de LH inmunoreactiva. PALABRAS CLAVE: Hormona luteinizante, Actividad biológica, Actividad inmunológica. ABSTRACT Luteinizing hormone (LH) undergoes posttranslational modifications that originate different charge isoforms. The study evaluated the differences in biological (B) and immunological (I) activity between isoforms of bovine LH.Isoforms were isolated by chromatofocusing from anterior pituitary glycoprotein extract. The biological activity was evaluated in an in vitro bioassay. Immunological activity was measured with a radioimmunoassay (RIA) specific for LH. The USDA-bLH-B5 standard was utilized as the reference. LH isoforms were grouped by their pH range of elution, in basic (A, pH, 10.75-9.75; B, pH 9.58-8.41), neutral (C pH, 7.98-6.89) and acidic (D, pH, 6.88-5.41; E, pH 5.36-3.46). The molecular weight of the heterodimer of each isoform was similar to the LH standard, estimated to be 36.5 kDa. Immunological and biological activity behaved in a dose-dependent manner. With respect to the LH standard, all isoforms required higher protein concentration to reach the IC50 of the inhibition curve. In the bioassay EC50 value for cAMP production was significantly different among isoforms; the neutral isoform showed a lower EC50 which was interpreted as more bioactive, the acidic isoform E showed an EC50 being the least bioactive and the basic was intermediate (P<0.05). In conclusion, the results suggest a quantitative effect of LH charge iso...

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Section: Discussionsupporting

confidence: 84%

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Section: Discussionunclassified

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Biological and immunological activity in bovine luteinizing hormone charge isoforms

Ortega¹,

Olivares

Murcia³

et al. 2016

Rev. Mex. Cienc. Pecu.

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“…Anobile et al [100] also observed an association between increased estradiol and basic FSH isoforms during the menstrual cycle and concluded that changes in gonadotropin isoforms through the human menstrual cycle are related to changes in the prevailing steroid environment. In contrast, Kojima et al [101] reported no change in FSH isoform distribution in the pituitary during the follicular phase of the estrous cycle in heifers. In agreement with this, Cooke et al [102] also reported no changes in circulatory FSH isoforms during the first or second follicular waves in beef heifers, however, did identify greater amounts of less acidic FSH isoforms during the preovulatory gonadotropin surge which was also associated with increased estradiol concentrations.…”

Section: Factors Influencing Gonadotropin Isoform Profilementioning

confidence: 89%