El objetivo del estudio fue determinar la resistencia antibiótica de bacterias aisladas de cuadros de mastitis subclínica en cuatro establos lecheros del distrito de Lurín, Lima - Perú, el año 2017. Se evaluaron 586 vacas Holstein sin cuadros de mastitis clínica durante la estación de verano, mediante la prueba de California Mastitis (CMT). Se colectaron muestras de leche de los cuartos que resultaron positivas al CMT (+, ++, +++) y se procedió al cultivo bacteriológico (agar sangre y agar McConkey) y se realizaron pruebas bioquímicas. Se evaluó la resistencia microbiana a ocho antibióticos utilizando la prueba de sensibilidad Kirby-Bauer. Se encontró 43.7% (256/586) de vacas con mastitis subclínicas y 12.4% (291/2344) de cuartos mamarios afectados. Las bacterias aisladas con mayor frecuencia fueron Klebsiella oxytoca (20.2%), Enterobacter cloacae (12.1%), y Streptococcus agalactiae (9.1%). Se observó resistencia a antibióticos en K. oxytoca a penicilina, cefalotina, amikacina, estreptomicina, tetraciclina, gentamicina, cefalexina y enrofloxacina entre un 62.9% y 91.9%. Las cepas de E. cloacae presentaron 100% de resistencia a la penicilina y para cefalotina, amikacina, estreptomicina, tetraciclina, gentamicina, cefalexina y enrofloxacina, entre 86.5% y 97.3%. En los aislados de S. agalactiae la resistencia observada a la penicilina, cefalotina, estreptomicina, tetraciclina, gentamicina, cefalexina y enrofloxacina estuvo entre el 10.7% y 82.1%. Para la amikacina la sensibilidad registrada fue del 100%.