1,3-Dioleoyl-2-palmitoylglycerol (OPO), an important structured triacylglycerol, is generally supplemented into infant and toddler formulas as a nutrient fortifier. However, its role on fecal microbiota has not received attention in the last decades. In this study, anaerobic fermentation in vitro and high-throughput sequencing were conducted to investigate effects of standard OPO alone (OPO-A) and OPO-enriched plant-oil formula (OPO-P) on toddler fecal microbiota. The results showed OPO could be efficiently utilized by toddler fecal microbiota. OPO supplementation enhanced the production of short-chain fatty acids and lactic acid by microbiota. Furthermore, OPO promoted the growth of Bifidobacterium whereas inhibited the growth of Enterobacter at different fermentation time when compared with the control group. Besides, OPO supplementation enhanced bacterial diversity. Thus, this study indicated that OPO could modulate the fecal microbiota. The results provided useful information for further exploring the physiological role of OPO on colon, and provided new ideas for application of OPO. Efectos del 1, 3-dioleoil-2-palmitoilglicerol y su fórmula de aceite vegetal en la microbiota fecal del niño pequeño durante la fermentación in vitro RESUMEN Generalmente, en fórmulas destinadas a lactantes y niños pequeños el 1,3-dioleoil-2-palmitoilglicerol (OPO), un importante triacilglicerol estructurado, se complementa como un enriquecedor de nutrientes. Sin embargo, en las últimas décadas no se ha dado atención al papel que desempeña en la microbiota fecal. En el presente estudio, se emplearon la fermentación anaeróbica in vitro y la secuenciación de alto rendimiento para investigar los efectos del OPO estándar solo (OPO-A) y la fórmula de aceite vegetal enriquecido con OPO (OPO-P) en la microbiota fecal de niños pequeños. Los resultados mostraron que el OPO podía ser utilizado eficientemente por ésta. La suplementación con OPO mejoró la producción de ácidos grasos de cadena corta y de ácido láctico por la microbiota fecal. Además, en comparación con el grupo de control, el OPO promovió el crecimiento de Bifidobacterium al tiempo que inhibió el crecimiento de Enterobacter en diferentes tiempos de fermentación. Asimismo, se comprobó que la suplementación con OPO mejora la diversidad bacteriana. Por lo tanto, este estudio constató que OPO puede modular la microbiota fecal. Los resultados proporcionaron información útil para explorar más a fondo el papel fisiológico de OPO en el colon y aportaron nuevas ideas para su aplicación. ABBREVIATIONS OPO: 1,3-Dioleoyl-2-palmitoylglycerol; PA: palmitic acid; OA: oleic acid; HMF: human milk fat; OPO-A: only standard OPO alone supplemented in basal microbiota culture medium; OPO-P: OPO-enriched plant-oil formula(a nutritional supplement of infant and toddler formulas in China) supplemented in basal microbiota culture medium; Control: no OPO added in the basal microbiota culture medium; ORI: original fecal microbiota; OTUs: operational taxonomic units; GC-MS: gas chromatography-mass spectr...