A família Cactaceae está distribuída principalmente nas Américas, apresentam uma grande importância econômica, fornecendo recursos energéticos para animais polinizadores e dispersores, podendo ser utilizadas na alimentação animal e humana, possui um grande potencial na medicina tradicional e no paisagismo. O objetivo do presente estudo foi selecionar indicadores e padronizar reações de PCR (Polymerase Chain Reaction) para analisar ISSR (Inter Simple Sequence Repeats) em estudos de variabilidade genética de Cactaceae. Foram testados 14 indicadores de ISSR com temperatura variando de 48° a 52°C, em espécies de Tacinga, e destes, 8 foram selecionados por serem polimórficos: ISSR-808, ISSR-827, ISSR-842, ISSR-845, ISSR-853, ISSR-857 ISSR-880 e ISSR-888. O número médio de sequências amplificadas por indicador foi de 11,5 bandas, com destaque para o indicador ISSR-827, que produziu 15 bandas, enquanto os indicadores ISSR-845 e ISSR-853 produziram apenas 8 bandas. Os 8 indicadores selecionados no presente estudo possibilitaram a diferenciação genética, sendo eficientes e indicando um bom nível de polimorfismo entre as espécies analisadas, dessa forma, poderão ser utilizados em futuros trabalhos para estimar a divergência genética em nível molecular em espécies da família Cactaceae.