Para conservar ex situ, promover el uso y la potenciación de germoplasma nativo de interés ornamental como T. viereckii subsp. major una especie en estatus de riesgo Pr, se planteó la presente investigación con el objetivo de regenerar esta especie en el laboratorio de cultivo de tejidos vegetales (LCTV) del Campo Experimental Saltillo CIRNE-INIFAP considerando la estabilidad del explante durante subcultivos subsecuentes, determinar el tipo y la concentración de fitohormonas y la mejor relación citocinina-auxina que más influyen en la etapa de multiplicación in vitro. El segmento intermedio del tallo (SIT) obtenido a partir de vitroplantas se usó como explante. De 2017 a 2019 se evaluó la etapa de multiplicación utilizando el medio Murashige-Skoog al 50% de sus macrosales. Un diseño experimental completamente al azar con arreglo factorial, se usó para evaluar dos citocininas: 6-bencil aminopurina (BAP) y 6-furfuryl aminopurina (KIN) en cuatro concentraciones 2.5, 5, 7.5 y 10 mg L-1 en interacción con dos auxinas: ácido naftalenacético (ANA) y ácido indolbutírico (AIB) en una relación citocinina-auxina de 10:1. Se evaluaron 16 tratamientos estableciendo cinco SIT/frasco con 10 repeticiones/tratamiento. Esta evaluación se repitió cinco veces mediante subcultivos, evaluando cada diez semanas el número de brotes/explante (Nb) y la altura del brote (Ab, mm). El análisis de varianza (Anova) demostró que hubo estabilidad del explante durante los subcultivos manteniendo una tasa de multiplicación semejante por más de tres años, efecto importante para una multiplicación intensiva. Al analizar los tratamientos como efectos independientes en la prueba de medias de Tukey (p≤ 0.05), se seleccionó la interacción BAP: AIB y KIN: AIB con las concentraciones de 5 mg L-1 de BAP + 0.5 mg L-1 de AIB y 2.5 mg L-1 de KIN + 0.25 mg L-1 de AIB como los tratamientos que inducen brotes con una tasa de multiplicación de 9.25 brotes/explante con una Ab de 6.73 mm.