Isolation and characterization of human monoclonal antibodies against hepatitis C virus envelope glycoproteins

Abstract

The isolation and characterization of human monoclonal antibodies (humAbs) against the hepatitis C Virus (HCV) glycoproteins E1 and E2 are described. B-cells from blood donors with anti-HCV were transformed with Epstein-Barr virus. The supernatants of the resulting lymphoblastoid clones were screened by ELISA with an extract of cells infected with a recombinant vaccinia virus RMPA95 expressing the envelope proteins E1 and E2 of an HCV genotype 1a virus (H strain). Positive clones were fused to the heteromyeloma cell line K6H6/B5. Fifteen heterohybridoma cell lines have been established. The specificity of the isolated humAbs was determined both by ELISA and Western blot assays. Several recombinant extracts expressing either the E1 or E2 protein or truncated forms were used in an attempt to map the epitopes on the viral glycoproteins. Some of the humAbs were used successfully for immunofluorescence investigation of transfected cells. Seven specific anti-E2 humAbs, which react with the envelope protein 2 of genotype 1a and 1b isolates, were characterized.

Monoklonal Antikor Teknolojisinin Dünü, Bugünü Ve Geleceği

“…Ardından, ilgili antijene karşı yüksek özgüllük ile bağlanabilen antikoru sentezleyen hücre ekstraktına antikorun Fv bölgesini (Çizim-3) içerecek şekilde sentezlenen primerler ile RT-PCR kurularak bağlanma bölgesine ait gen zincirine ve onun kodladığı protein zincirine ulaşılmaktadır21 . Son basamakta ise CHO (çin hamster ovaryumu) hücreleri veya benzeri bir konak kullanılarak rekombinant DNA teknolojisi yöntemleri ile ilgilenilen antijene yüksek özgüllük ile bağlanabilen bütüncül yapıdaki antikorun üretimi gerçekleştirilebilmektedir11 .hücreleri26 , nodüler lenfoma hastasından izole edilmiş malign lenfoid hücreleri27 veya megakaryoblastik lösemi hücreleri28 de kullanılabilmektedir. Bu alanda yapılan önemli bir çalışmada; sıklıkla hibridoma oluşturmada tercih edilen Sp2 fare miyeloma hücre hattı hücrelerine fare interlökin-6 ve insan telomeraz katalitik alt-ünitesi'ni (TERT) eş zamanlı olarak ekspirese edebilmesi özelliği kazandırılmıştır.…”