Lee's Multi-Differential Agar (LMDA); A Culture Medium for Enumeration and Identification of Brewery Bacteria

Methods for detection and identification of beer-spoilage microbes

“…Bacterial detection is often performed using Universal Beer Agar (UBA) ( Kozulis and Page, 1968 ) or Schwarz Differential Agar, also called Lee’s Multi-Differential Agar (SDA/LMDA) ( Lee et al, 1975 ) media containing cycloheximide to suppress pitching yeast growth. Cycloheximide is an antibiotic produced by Streptomyces griseus that is a eukaryotic protein synthesis inhibitor and has also been shown to inhibit DNA synthesis in yeast, while having no effect on bacteria ( Morris, 1966 ).…”

GROWTH RESPONSE AND RECOVERY IN SELECTIVE MEDIA OF A LYSINE AUXOTROPH ESCHERICHIA COLI FOR A RAPID MICROBIOLOGICAL ASSAY

“…To prevent feed fungal growth the antifungal agent cycloheximide was included. Cycloheximide has been utilized for isolation of indigenous microflora from soil fungi and brewing yeast in soil, brewery and water samples (Brenner and Hsu 1971;Lee et al 1975;Newell et al 1983;Pillai and Pepper 1991). It also has been utilized to inhibit fungal populations in moist, stored grain in order to successfully enumerate bacterial populations (Clarke and Hill 1981;Nichols and Leaver 1966) and is effective in suppressing indigenous feed fungi colonies without inhibiting the growth of E. coli (Ha et al 1995).…”

Lactic acid bacteria and cultivation methods of their detection - Part I.

“…3, komplexní médium obsahující maltosu a fruktosu, bylo navrženo pro detekci mléčných bakterií (Saha et al�, 1974)� V porovnání s UBA, WLD a půdou z rajčatového džusu na ní mléčné bakterie rostly rychleji a tvořily větší kolonie (Casey and Ingledew, 1981)� Půda je doporučována Evropskou pivovarskou konvencí (European Brewery Convention; EBC) k rutinním kontrolám piva a pivovarského provozu� Neobsahuje pivo a její součástí jsou maltosa a fruktosa� Není dostatečně selektivní vůči bakteriím, které nekazí pivo, současně má menší záchyt pivu škodících mléčných bakterií, a proto má spíše informativní význam (Jespersen a Jakobsen, 1996)� Médium je používáno ve srovnávacích studiích (Crumplen et al�, 1991;Suzuki et al�, 2008b;Taskila et al�, 2011)� Hsuovo Lactobacillus-Pediococcus médium (HLP-médium, HLPM) ve ztužené nebo poloztužené formě bylo navrženo pro identifikaci bakterií mléčného kvašení (Hsu et al�, 1975 Leeho multidiferenciální agar (Lee's multidifferential agar, LMDA) je živné médium, které umožňuje detekci běžných mikroorganismů vyskytujících se v prostředí pivovaru, včetně pivu škodících bakterií� Médium není plně selektivní, přídavkem aktidionu lze zabrá-nit růstu kvasinek� LMDA obsahuje bromkresolovou zeleň a uhličitan vápenatý -křídu� Ve vodě nerozpustná křída vytváří v agaru mléčný zákal, který se v případě produkce kyselin rozpustí a kolem kolonií se vytvoří zřetelné "vyčeřené zóny" způsobené vznikem octanu vá-penatého, který již je ve vodě rozpustný; při použití bromkresolové zeleně dochází k probarvení média v okolí kolonií vlivem změny pH a také k různému zbarvení kolonií v důsledku zadržování barvičky� Nastavením kultivačních podmínek lze rozlišit bakterie produkující kyseliny -kultivace za aerobních podmínek dovoluje růst octových bakterií a za anaerobních podmínek pediokoků a laktobacilů (Lee et al�, 1975)� Jednoduchým a levným médiem pro růst laktobacilů a pediokoků nacházejících se v pivovarském provoze je sacharosový agar (Sucrose agar), který však je ve své základní formě neselektivní a umož-ňuje růst i ostatních pivu škodících organismů (Boatwright a Kirsop, 1976)� Autoři uvádějí různé možnosti modifikace sacharosového agaru, např� přídavek práškové křídy a/nebo bromkresolové zeleně pro zvýšení kontrastu mezi koloniemi a agarem� Přídavek mikrobiál-ních inhibitorů (aktidion, β-fenylethanol) umožní zvýšení selektivity média pro mléčné bakterie� V roce 1978 byla půda mezi metodami doporučovanými EBC pro detekci mléčných bakterií při pivovarské kontrole� V jiných studiích je však použitelnost sacharosového agaru pro účely detekce mléčných bakterií zpochybňována -u různých druhů a kmenů byla pozorována různá schopnost utilizace sacharosy a jiných cukrů (Lawrence a Leedham, 1979)� MRS agar modifikovaný přídavkem 0,5 % maltosy (tzv� MRS+M agar) byl porovnáván s WLD, standardním MRS, UBA a LMD-agary� Půda obsahující zároveň glukosu a maltosu zachycuje větší spektrum mléčných bakterií než ostatní uvedené půdy a je také vhodnější než sacharosový agar (Lawrence a Leedham, 1979)� Půda NBB byla původně vyvinuta Backem (1980) jako základní nespecifické médium� Její složení bylo dále upraveno tak, aby poskytla rychlejší výsledky a umožnila větší záchyt pivu škodících mikroorganismů než VLB-S7 ...…”