Novos cimentos a base de silicato de cálcio prontos para uso (exemplo, Bio-C Sealer e Sealer Plus BC) provaram ser materiais bioativos e biocompatíveis. No entanto, sua atividade antimicrobiana ainda não foi totalmente desvendada. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana dos cimentos biocerâmicos (Bio-C Sealer, Sealer Plus BC e BioRoot RCS) em comparação com os cimentos à base de resina (AH Plus, Sealer Plus e MTA Fillapex). Os cimentos frescos foram testados contra biofilmes de Enterococcus faecalis, usando testes de contato direto e indireto. As unidades formadoras de colônias foram contadas após 24 horas. Adicionalmente, ensaio cristal violeta foi utilizado para avaliar os efeitos dos extratos dos cimentos na biomassa do biofilme. Medidas de densidade óptica foram usadas para quantificar a biomassa. Os cimentos biocerâmicos apresentaram maior atividade antimicrobiana que os cimentos à base de resina quando em contato direto com biofilmes (P < 0,05). Sealer Plus BC e Bio-C Sealer apresentaram maior atividade antimicrobiana do que AH Plus no teste indireto (P < 0,05), sugerindo maior difusão desses materiais. O ensaio cristal violeta revelou que o Sealer Plus BC foi o material mais eficaz na redução da massa do biofilme (P <0,05) apresentando uma diferença significativa com os outros cimentos biocerâmicos. O Bio-C Sealer e o Sealer Plus BC apresentaram maior atividade antimicrobiana que o AH Plus contra biofilmes de E. faecalis nos testes direto e indireto. Além disso, Sealer Plus BC apresentou o melhor efeito na biomassa do biofilme.