As proteases constituem um grupo de enzimas que apresentam elevada aplicabilidade em diversos setores industriais, sendo obtidas de fontes animais, vegetais e microbianas. Entre os fungos, os cogumelos têm se destacado como fonte de proteases com potencial biotecnológico. O objetivo deste trabalho foi investigar a produção de proteases por cogumelos, utilizando a fermentação em meio líquido. A cultura matriz foi preparada em ágar batata dextrose, acrescida de extrato de levedura 0,5% (p/v), e o bioprocesso foi conduzido durante cinco dias, a 150 rpm e 25 °C. Azocaseína 1% (p/v) foi utilizada como substrato para avaliar a atividade proteolítica dos cogumelos. Entre as espécies avaliadas, Pleurotus albidus (Berk.) Pegler 1983 foi a produtora significativa de proteases (34,00 U/mL) e a síntese dessas enzimas foi estimulada pela idade e pelo volume do inóculo. Essas enzimas mostraram atividade ótima em pH 5 a 60 °C e estabilidade em pH 5-8, com temperaturas de 30 a 60 °C. As proteases foram classificadas como cisteíno e serinoproteases.