Sigma-class glutathione transferase from Xenopus laevis: molecular cloning, expression, and site-directed mutagenesis

Carletti, Erminia; Luca, Antonella De; Urbani, Andrea; Sacchetta, Paolo; Ilio, Carmine Di

doi:10.1016/j.abb.2003.08.024

Cited by 11 publications

(6 citation statements)

References 43 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…We found that GSTS1 was stable in a wide pH range and the experimental conditions. The result of thermostability is similar to that of sigma-class GST of Xenopus laevis, because the X. laevis GST lost 50% of activity after incubation at 47.5°C for 30 min (Carletti et al 2003). GSTS1 had GSH-conjugating activity towards CDNB, comparable with results of other sigma-class GSTs (Valles et al 2003;Rauch and Nauen 2004).…”

Section: Discussionsupporting

confidence: 66%

“…We found that GSTS1 was stable in a wide pH range and the experimental conditions. The result of thermostability is similar to that of sigma‐class GST of Xenopus laevis , because the X. laevis GST lost 50% of activity after incubation at 47.5°C for 30 min (Carletti et al. 2003).…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 79%

“…1998). It is reported that this class GST of X. laevis is unable to catalyse the conjugation reaction with 4‐HNE (Carletti et al. 2003).…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

“…Alpha-class mammalian GSTs had greater affinities based on K m values (Singhal et al 1994;Board 1998;Liu et al 1998). It is reported that this class GST of X. laevis is unable to catalyse the conjugation reaction with 4-HNE (Carletti et al 2003). This indicates that the substrate specificity of this class GST is not universal.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

See 3 more Smart Citations

Identification of a sigma‐class glutathione‐S‐transferase from the silkworm,Bombyx mori

Yamamoto

Zhang

Banno

et al. 2006

J Applied Entomology

View full text Add to dashboard Cite

A cDNA that encodes a glutathione-S-transferase belonging to sigma class (GSTS1) from the silkworm, Bombyx mori was cloned by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and sequenced. The deduced amino acid sequence revealed 66%, 48% and 41% identity to sigma-class GSTs from Manduca sexta, Blattella germanica and Anopheles gambiae, respectively. The GSTS1 was also estimated to be close to those GSTs in a phylogenetic tree. GSTS1 mRNA was widely distributed in various tissues. The recombinant GST (rGSTS1) was functionally overexpressed in Escherichia coli in a soluble form, purified to homogeneity and characterized. The pH-optimum of rGSTS1 was around pH 8. The rGSTS1 retained more than 75% of its original activity after incubation at pH 4-9. Incubation for 30 min at temperatures below 40°C did not affect its activity. rGSTS1 was able to catalyse the reaction of glutathione with 1-chloro-2,4-dinitrobenzene, the universal substrate for GST, as well as with 4-hydroxynonenal, the product of lipid peroxidation.

show abstract

Section: Discussionsupporting

confidence: 66%

Section: Discussionmentioning

confidence: 79%

“…1998). It is reported that this class GST of X. laevis is unable to catalyse the conjugation reaction with 4‐HNE (Carletti et al. 2003).…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

See 2 more Smart Citations

Identification of a sigma‐class glutathione‐S‐transferase from the silkworm,Bombyx mori

Yamamoto

Zhang

Banno

et al. 2006

J Applied Entomology

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Ειδικά, το AITC διαδραματίζει κύριο ρόλο στην άμυνα έναντι φυτοφάγων οργανισμών, τα οποία είναι γνωστά για τις βλαβερές συνέπειες για το ίδιο το φυτό, και αποθηκεύεται με τη μορφή της γλυκοζινόλης η οποία είναι ακίνδυνη (Agrawal & Kurashige, 2003;Chronopoulou et al, 2012) . (Jowsey et al, 2001, Kanaoka et al, 2000, η όρνιθα (Thomson et al, 1998) και ο βάτραχος (Carletti et al, 2003), οι θαλάσσιοι οργανισμοί όπως το καλαμάρι (Harris et al, 1991) και τα κωπήποδα (Lee et al, 2007) με τις GSTs τους να παρουσιάζουν εξειδίκευση σχεδόν αποκλειστικά για το υπόστρωμα CDNB. Το ίδιο παρατηρείται και για τους νηματώδεις του γένους Taeni (TsMoGST) και σε οργανισμούς όπως οι κάμπιες των πεύκων, οι μεταξοσκώληκες και οι γαιοσκώληκες, όπου GSTs που ανήκουν στη Sigma τάξη έχουν απομονωθεί (HcGST, BmGSTS1 και LrGSTS αντίστοιχα) παρουσιάζουν δραστικότητα μόνο ως προς CDNB, χωρίς να εμφανίζουν ιδιαίτερη εξειδίκευση προς τα υπόλοιπα υποστρώματα (Liebau et al, 1996, Yamamoto et al, 2007, Yamamoto et al, 2006, LaCourse et al, 2009.…”

Section: συζητησηunclassified

Μελέτη Και Αξιολόγηση Μικροφυκών Ως Πηγή Προϊόντων Υψηλής Προστιθέμενης Αξίας

Χατζηκωνσταντίνου¹

View full text Add to dashboard Cite

Σκοπός της παρούσας διατριβής ήταν η μελέτη των ακατέργαστων υδατικών εκχυλισμάτων από μικροφύκη Chlorella sp., Nannochloropsis sp., Tetraselmis sp. και Phaeodactylum sp.. Μια τέτοια μελέτη στοχεύει στην ανάγκη εύρεσης νέων πράσινων πηγών, πλούσιων σε αντιοξειδωτικές ουσίες, ώστε να χρησιμοποιηθούν ως πρώτες ύλες στη βιομηχανία τροφίμων και καλλυντικών. Επιπρόσθετα, μελετήθηκαν ένζυμα GSTs από το γένος Chlamydomonas με στόχο την απόκτηση περαιτέρω γνώσεων που σχετίζονται με GSTs από θαλάσσιους οργανισμούς.Με στόχο την κατανόηση του ρόλου των GSTs στους φωτοσυνθετικούς οργανισμούς αλλά και την εύρεση στοιχείων για την ανάπτυξη νέων βιοτεχνολογικών εφαρμογών, ακολούθησε η μελέτη του γονιδιώματος Chlamidomonas reinhardtii. Τα αποτελέσματα φανέρωσαν την παρουσία 15 GST-like ενζύμων (CrGSTs) τα οποία αναλύθηκαν φυλογενετικά. Τα ισοένζυμα CrGST10 και CrGST7, που φαίνεται να ανήκουν στη Sigma τάξη, κλωνοποιήθηκαν, εκφράστηκαν σε βακτηριακά κύτταρα E. coli και προσδιορίστηκε η εκλεκτικότητά τους έναντι ηλεκτρονιόφιλων υποστρωμάτων. Ακολούθησε μελέτη της δομής και της κινητικής συμπεριφοράς με μοριακή μοντελοποίηση και κατευθυνόμενη μεταλλαξογέννεση. Συγκεκριμένα, επιβεβαιώθηκε ο καταλυτικός ρόλος του αμινοξέος Tyr7 ενώ διερευνήθηκε ο ρόλος του αμινοξέος Trp99 στον προσδιορισμό εξειδίκευσης ηηλεκτρονιόφιλων υποστρωμάτων, στην επίδραση του pH και στη θερμοσταθερότητα.Η διατριβή ολοκληρώθηκε με την απομόνωση του ενζύμου CrGST8 από cDNA βιβλιοθήκηChlamidomonas, το οποίο φαίνεται να ανήκει στην τάξη Theta. Η υπερέκφραση του ενζύμου CrGST8 οδήγησε σε ενδοκυτταρική συσσώρευση μερικώς αναδιπλωμένων πρωτεϊνών (έγκλειστα σωμάτια). Ακολούθησαν δοκιμές βελτιστοποίησης των συνθηκών έκφρασης με χρήση διαφορετικής συγκέντρωσης IPTG και θερμοκρασίας. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι συγκεκριμένοι παράγοντες δεν επηρεάζουν στη δημιουργία των συσσωματωμάτων. Στη συνέχεια έγινε χρήση χαοτροπικών ουσιών όπως η ουρία και το χλωρίδιο του γουανιδίου. Με σκοπό τον έλεγχο της επίδρασης μιας ηπιότερης μεθόδου αναδίπλωσης, έγινε δοκιμή διαλυτοποίησης του ενζύμου με χρήση προπανόλης. Θετικά αποτελέσματα παρουσίασαν μόνο οι χαοτροπικές ουσίες και κυρίως η ουρία. Έπειτα πραγματοποιήθηκε μελέτη της εκλεκτικότητας του ενζύμου έναντι διαφορετικών υποστρωμάτων. Η επίδραση του pH στην ενζυμική δραστικότητα του CrGST8 έδειξε ότι εμφανίζει προτίμηση στην όξινη περιοχή των pH με μέγιστη τιμή στο pH 5,6, ενώ σε pH 7 η ενζυμική δραστικότητα έχει σχεδόν μηδενιστεί.Συνοψίζοντας, τα μικροφύκη έχουν κεντρίσει την προσοχή του βιομηχανικού τομέα, με την εφαρμογή τους να απαντάται σε ποικιλία προϊόντων όπως σε τρόφιμα, φάρμακα και καλλυντικά. Η χρήση αντιοξειδωτικών από φυσικές και πράσινες πηγές όπως τα μικροφύκη αντιπροσωπεύει έναν τομέα που κερδίζει μεγάλο ενδιαφέρον στη διάρκεια του χρόνου με ευρύ φάσμα βιοτεχνολογικών εφαρμογών. Τα ευρήματά μας υπογραμμίζουν ότι τα εκχυλίσματα των ειδών Chlorella και κυρίως του στελέχους Chlorella minutissima, αντιπροσωπεύουν πολλά υποσχόμενα βιοδραστικά συστατικά με δυνατότητα χρήσης τους ως πρώτες ύλες. Tέλος, ο χαρακτηρισμός των ενζύμων CrGST10, CrGST7 και CrGST8 από το στέλεχος Chlamydomonas reinhardtii και η φυλογενετική ανάλυση έδωσαν πληροφορίες σχετικά με την εξέλιξη της οικογένειας των GSTs και το μηχανισμό δέσμευσης του υποστρώματος και εξειδίκευσης.

show abstract

The glutathione transferase family of Chlamydomonas reinhardtii: Identification and characterization of novel sigma class-like enzymes

et al. 2017

View full text Add to dashboard Cite

Sigma-class glutathione transferase from Xenopus laevis: molecular cloning, expression, and site-directed mutagenesis

Cited by 11 publications

References 43 publications

Identification of a sigma‐class glutathione‐S‐transferase from the silkworm,Bombyx mori

Identification of a sigma‐class glutathione‐S‐transferase from the silkworm,Bombyx mori

Μελέτη Και Αξιολόγηση Μικροφυκών Ως Πηγή Προϊόντων Υψηλής Προστιθέμενης Αξίας

The glutathione transferase family of Chlamydomonas reinhardtii: Identification and characterization of novel sigma class-like enzymes

Contact Info

Product

Resources

About