O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito in vitro da aplicação de partículas de quitosana carregadas com fluoreto de sódio (Quit/NaF) no esmalte dentário após desafio cariogênico com S. mutans (UA159). A suspensão de partículas de Quit/NaF foram sintetizadas por gelificação iônica e a caracterização da suspensão foi avaliada por titulação em reômetro dinâmico avaliando a viscosidade (η) e interação molecular por espectroscopia de absorção na região do infravermelho (FTIR). A estabilidade das partículas em suspensão foi avaliada por meio do ZP, Dh e pH durante um mês, com intervalo de uma semana entre as medidas. Após a obtenção da razão molar/estequiométrica do complexo NaF/Quitmonômeros pela titulação em reômetro, as suspensões de partículas de Quit/NaF com concentração de fluoreto de 0,05% e 0,2% foram preparadas pela mistura das soluções de quitosana (2 mg/mL - 0,0118 mol/L e 8,5 mg/mL- 0,0475 mol/L) e NaF (0,5 mg/mL - 0,0118 mol/L e 2 mg/mL - 0,0475 mol/L) em solução de ácido acético 1% v/v. Posteriormente foram realizados os testes de concentração inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM) para os nove grupos foram formados: 1) Quit 0,05%; 2) NaF 0,05%; 3) Suspensão de Quit/NaF 0,05%, 4) Controle 0,05% (ácido acético); 5) Quit 0,2%; 6) NaF 0,2%; 7) Suspensão de Quit/NaF 0,2%; 8) Controle 0,2%; e 9) Digluconato de Clorexidina 0,12% (CLX) - controle positivo. O efeito na formação de biofilme sob a superfície do esmalte dentário humano foi avaliado por dureza de superfície (Knoop) e por contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mL). Vinte e três blocos de esmalte (4 x 4 mm) foram obtidos de terceiros molares e incluídos em resina acrílica. Nove grupos foram formados (n= 5) conforme citado anteriormente. Os dados de microdureza foram analisados por ANOVA de medidas repetidas, One Way ANOVA e Tukey (= 0,05) e os resultados de UFC/mL foram analisados por Shapiro-Wilk, Levene e ANOVA de medidas repetidas. No início da titulação a quitosana apresentou maiores valores de η. Com a adição de NaF, houve uma redução nos valores da viscosidade até a razão molar de [NaF]/ =[Quit] ≈ 0,64, que foi atribuído à neutralização da cadeia polimérica. Os espectros de FTIR mostraram interação entre Quit-NaF, evidenciando a formação de micropartículas. Os testes de estabilidade mostraram a formação de micropartículas estáveis. A CIM da suspensão de partículas de Quit/NaF a 0,05% e 0,2% foi de 0,65 mg/mL e a CBM foi 0,65 mg/mL e 1,3 mg/mL, respectivamente. A suspensão de partículas de Quit/NaF 0,2% mostrou redução de UFC/mL de S. mutans quando comparado aos compostos isolados na mesma concentração (Quit 0,2% e NaF 0,2%). Os grupos Quit/NaF em ambas as concentrações (0,05% e 0,2%) e CLX apresentaram maiores valores de dureza e menor perda de dureza após o desafio cariogênico com S. mutans. A suspensão de Quit/NaF nas concentrações de 0,05% e 0,2% apresentaram atividade antimicrobiana contra S. mutans e minimizaram a desmineralização do esmalte após desafio cariogênico, demonstrando potencial para serem utilizadas em enxaguatórios bucais no controle da cárie dentária.