Introducción: El uso de catéteres intravasculares constituye una herramienta fundamental para el cuidado de los pacientes, mismos que han sido asociados a las bacteriemias nosocomiales entre un 15 y 30%. El objetivo de estudio fue determinar el nivel de conocimiento y cumplimiento del personal de enfermería respecto al protocolo de cuidados de accesos vasculares centrales. Materiales y métodos: estudio descriptivo, transversal, observacional, que incluyó a 67 profesionales de enfermería que tuvieron a su cuidado pacientes con catéter venoso central. Para la recolección de datos se utilizaron dos instrumentos diseñados a partir del protocolo de cuidados emitido por la Comisión Permanente de Enfermería. Resultados: Se encontró personal con antigüedad laboral promedio de 7.9 años. En conocimiento el 58.2% se ubicó en categoría Conoce, en contraste con el cumplimiento resultando el 91% del personal en categoría Cumple. No hubo correlación entre conocimiento y cumplimiento (rho = -0.181, p = 0.797). Discusión: El cumplimiento contrastó con el conocimiento, sin embargo, los enunciados para ambas variables se relacionaron con la falta de lavado de manos, dejar el tiempo adecuado de los antisépticos y la desinfección de lúmenes a la hora de la manipulación. Conclusiones: La falta de conocimiento y cumplimiento de elementos del protocolo se relacionan directamente con situaciones procedimentales que realiza el profesional de enfermería, por lo que la falta de material e insumos no son factores para no seguir la estandarización del cuidado.