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Immunoglobulin G subclass responses to lipoarabinomannan (LAM) of Mycobacterium tuberculosis were determined by ELISA in both HIV-1 antibody positive (n = 31) and negative (n = 43) patients with tuberculosis (TB). Responses were also studied in a group of healthy controls (n = 16) and HIV-1 antibody positive (n = 60) individuals without TB. IgG2 antibodies were the predominant subclass, being present in 25 of 43 non-HIV-infected TB patients (58%) and in 11 of 31 HIV-infected TB patients (35%). However, HIV+ TB patients also showed IgG4 (n = 16; 52%), and IgG1 (n = 4, 13%) responses to LAM, whereas these subclasses were absent in sera from HIV-TB patients. Individuals in both non-tuberculous control groups showed no antibody responses to LAM. The influence of HIV infection on B cell responses to LAM, and possible mechanisms for antibody-mediated regulation of immunity to TB, are explored.

Messa a punto di un saggio EliSPOT per la rilevazione della risposta immunitaria CMV-specifica SUMMARY Introduction: The Cytomegalovirus (CMV) is the major cause of morbidity and mortality in solid organ (SOT) and bone marrow (BMT) transplantation. An early reconstitution of immune response is crucial in limiting CMV replication; on the other hand, a late reconstitution may determine CMV reactivation with possible evolution to symptomatic phase.The Enzyme-Linked Immunosorbent Spot (EliSPOT) assay is a useful tool for monitoring the CMV-specific immune response recovery in transplant patients.This study propose the development and optimization of a interferon-gamma-(IFN-γ)-based EliSPOT assay for the detection of CMV immune response. Methods: CD3 + lymphocytes were separated using Robosep (negative selection, HLA ® EasySep WB Human T Cell Enrichment Kit, Stemcell Technology,Vancouver, Canada). The EliSPOT assay was optimized using the Human IFN gamma ELISPOT Kit and a modified protocol provided by Nanogen Advanced Diagnostics (Buttigliera Alta, Italy). Different parameters were analyzed: number of cells (200,000 -300,000), antigens (CMV peptide mix and whole CMV antigen), incubation time (18 -20 -22 -24h), number of washes, incubation conditions with secondary antibody and conditions of substrate development. Results: Herein we report the optimal conditions identified. 200,000 CD3+ cells per well were stimulated with CMV peptide mix antigens. Cells were stimulated for 18h at 37 °C in humidified atmosphere; wells were washed and secondary antibody was added and incubated at room temperature for 2h. After incubation a second series of washes were performed. Substrate was added and incubation for 15 minutes was carried out.The reaction was detected by plate reader AID ELISPOT (Strassberg, Germany). Conclusions: We developed an EliSPOT assay for the detection of CMV-immune response and reconstitution.All variables were compared to previous published protocols.The improvement of the EliSPOT assay for the detection of CMV-specific immune response represents the first step for result evaluation in clinical practice.

INTRODUZIONEI polyomavirus KI e WU sono stati recentemente identificati in campioni respiratori di pazienti con infezioni acute delle vie aeree, sebbene le associazioni patologiche, l'epidemiologia molecolare e il tropismo tessutale siano poco noti (1-3). L'obiettivo di questo studio è stato di determinare la presenza di KIV e WUV nel tessuto tonsillare di pazienti immunocompetenti per valutare se le tonsille possano costituire un sito di infezione e persistenza. In concomitanza è stata anche valutata la presenza dei polyomavirus BK, JC e SV40. MATERIALI E METODILa presenza di polyomavirus KI, WU, BK, JC e SV40-DNA è stata valutata in uno studio prospettico su campioni di tonsille ottenuti da 29 pazienti immunocompetenti (M/F, 13/16; età media, 22.0 anni; range, 4-59) sottoposti a tonsillectomia per patologie non neoplastiche. L'estrazione degli acidi nucleici è stata effettuata con l'estrattore automatico NucliSens easyMag system (bioMérieux). La presenza e la quantificazione della carica virale è stata effettuata mediante Real-time Taqman PCR quantitativa: metodica home-made per i geni VP1 di KI e VP2 di WUV (Tabella 1); per il gene large T di JCV e SV40; kit commerciale BKV Q-PCR Alert Kit per BKV (4,5). RISULTATI KIV-DNA è stato individuato in 2/29 (6.9%) tonsille (ottenute da una paziente adulta e una bambina), mentre WU, BK, JC e SV40 sono risultati negativi in tutti i casi. Nessun paziente aveva presentato un episodio acuto di infezione delle vie aeree superiori nelle tre settimane precedenti alla tonsillectomia. CONCLUSIONILa prevalenza di KIV riscontrata nei campioni di tonsille è risultata simile a quella riportata in studi della letteratura in campioni delle vie aeree o tessuto linfoide; mentre nessuno dei nostri campioni è risultato positivo a WU. Nel complesso, in base ai nostri dati e a quelli della letteratura (6-8), sembra che il tessuto linfoide possa albergare i polyomavirus, sebbene a bassa prevalenza. Sono necessari ulteriori studi per comprendere il significato della presenza di KIV nel tessuto tonsillare e valutare la possibilità che il virus possa stabilire un'infezione latente e/o persistente in questa sede. in tonsils from immunocompetent children.

INTRODUZIONELa micosi fungoide (MF) (1) è la forma più co mune dei linfomi cutanei a cellule T (CTCL) e può essere definita come un linfoma nonHodgkin periferico, epidermotropo a basso grado di malignità. Generalmente confinata alla cute, anche di tutto il corpo, mostra una graduale progressione clinica con una sequenziale comparsa di chiazze, placche e noduli tumorali. La stadiazione è effettuata utilizzando la classificazione TNM. L'istologia evidenzia un infiltrato linfo-istiocitario dermico con variabile grado di epidermotropismo, cioè la presenza di elementi linfoidi atipici infiltranti l'epidermide o gli annessi, con singole cellule e/o piccoli clusters, filiere lungo la membrana basale o caratteristiche raccolte denominate "microascessi di Pautrier". I linfociti atipici presentano in genere nucleo convoluto o cerebriforme (cellule di Sézary). Dal punto di vista fenotipico sono cellule T, generalmente helper CD4+ e raramente suppressor CD8+ (1). La Sindrome di Sézary (SS) (1) è una rara variante leucemica dei linfomi cutanei primitivi a cellule T, inclusa tra le forme aggressive. Interessa esclusivamente gli adulti, in genere in età avanzata. La presentazione clinica è una triade caratterizzata da prurito, eritrodermia e linfoadenopatia. Spesso sono presenti distrofia ungueale, cheratosi palmo-plantare, facies leonina. La prognosi è sfavorevole ed oltre alla progressione in linfoma ad alto grado, meno frequente, la morte spesso risulta dovuta alle complicanze infettive che insorgono per diminuzione delle difese legate alle barriere cutanee ed alla immunodepressione conseguente sia alla terapia che alla malattia stessa. L'istologia è simile a quella della MF, con minor grado di epidermotropismo e in alcuni casi è dif- The aim of this study was to retrospectively evaluate the EBV-DNA load in skin biopsies from MF and SS patients by a highly sensitive (1-10 EBV-DNA copies/reaction) quantitative-competitive PCR (QC-PCR) developed in our lab to better asses the relationship between EBV and CTCL. Skin biopsies were obtained from 21 MF and 10 SS patients; skin biopsies from a 8 patients with inflammatory skin disease were used as controls. EBV-DNA was detected in 70% of biopsies from SS patients vs. 0% of MF patients. No control patients resulted EBV-DNA positive, as expected. In addition, in SS patients, the survival from diagnosis is lesser in EBV-positive patients vs. EBV-negative patients even if not statistically significant.We are going to investigate the presence of EBV-DNA in peripheral blood of a larger number of patients and to evaluate the pattern of viral genes expression, to better assess the aetiopathogenetical role of EB virus in this kind of neoplasies.