En el Perú, la leishmaniasis es una enfermedad metaxénica que representa un serio problema de salud pública, debido a su amplia distribución y al número de personas en riesgo de contraer la enfermedad, siendo la población vulnerable principalmente las personas de bajos recursos económicos. El estudio se realizó a partir de pacientes que fueron derivados al Instituto Nacional de Salud entre el 2006 y el 2011 para que se les realizara el diagnóstico especializado. La identificación de la especie de Leishmania infectante se desarrolló mediante el análisis de las curvas de disociación (HRMA) obtenidas a partir del ADN genómico de promastigotes y amastigotes, lo que permitió identificar las especies de Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (V.) guyanensis, Leishmania (V.) peruviana como las más prevalentes, además de Leishmania (V.) lainsoni y Leishmania (L.) amazonensis.

Background The parasite of the genus Leishmania causes a neglected disease known as leishmaniasis, which has different clinical aspects depending on the species that infects the person and the immune response of the patient. The objective was to determine, using molecular biology, the current circulating species of Leishmania in biopsies of different types of cutaneous leishmaniasis (CL) from the endemic district in the region of “Madre de Dios”, Peru. Methods The study's 19 samples were obtained in the Huepethue district in the “Madre de Dios” region from patients who were diagnosed for suspected leishmaniasis infection with three clinical manifestations. These were analyzed using kDNA-PCR, Nested-PCR and HRM-PCR to identify the genus of an infecting parasite as well as its species. Results kDNA-PCR detected all tests for the genus of Leishmania to be positive, while the Nested-PCR could not detect 20.9% of species (one L . ( V .) braziliensis and three L . ( V .) amazonensis ), and the HRM-PCR detected all species presented in the samples. The most prevalent species was L . ( V .) braziliensis (73.7%), and the clinical manifestations were ulcers (63.2%), superficial scabs (5.3%) and diffuse form (5.3%), followed by L . ( V .) amazonensis (15.8%), manifesting ulcers (15.6%), and L . ( V .) lainsoni (10.5%), manifesting superficial scabs (5.3%) and ulcers (5.3%). L . ( V .) braziliensis , L . ( V .) amazonensis and L . ( V .) lainsoni were detected effectively using HRM-PCR in the samples with different clinical manifestations. Conclusions Highlighting the findings of a high diversity of Leishmania species using High Resolution Melting PCR in biopsies with different clinical manifestations of cutaneous leishmaniasis.

RESUMENLas manifestaciones clínicas de la leishmaniosis son variables y están relacionadas con la especie infectante, su relación con el medioambiente y con la respuesta inmune del hospedero. Se presenta un caso de leishmaniosis andina cutánea tardía con una manifestación extensa. El caso se confirmó a través de estudios microbiológicos e inmunológicos, la identificación se realizó mediante secuenciamiento del gen del citocromo b, determinándose la especie como Leishmania (Leishmania) amazonensis. La paciente recibió tratamiento con estibogluconato sódico y al término de la terapia, mostró mejoría clínica de las lesiones. Se recomienda considerar a la leishmaniosis en el diagnóstico diferencial cuando se atienda ulceras crónicas dermatológicas atípicas. Palabras clave: Leishmaniasis cutánea; Leishmania; Citocromos b (fuente DeCS BIREME). CUTANEOUS LEISHMANIOSIS: UNUSUAL CLINICAL MANIFESTATION ABSTRACTClinical manifestations of leishmaniasis are diverse and related to the infecting species, its relationship with the environment and the host immune response. A case of late Andean cutaneous leishmaniasis with extensive manifestation is presented. The case was confirmed through microbiological and immunological studies; identification was performed by cytochrome b gene sequencing and the species was determined as Leishmania (Leishmania) amazonensis. The patient was treated with sodium stibogluconate and at the end of therapy the patient showed clinical improvement of the lesions. It is recommended to consider leishmaniasis in differential diagnosis when treating atypical dermatological chronic ulcers.

RESUMENObjetivos. Determinar la capacidad infectiva de los promastigotes de Leishmania (V.) peruviana y Leishmania (V.) braziliensis en la línea celular macrófago-monocítica de Canis familiaris DH82. Materiales y métodos. Se realizó un estudio experimental durante los meses de enero a diciembre de 2013. Se utilizaron cepas referenciales de Leishmania (V.) braziliensis MHOM/PE/84/LC53 y Leishmania (V.) peruviana MHOM/PE/84/LC26. La línea celular fue infectada con promastigotes en fase estacionaria y la capacidad infectiva fue determinada como el producto del porcentaje de macrófagos infectados por el promedio de amastigotes por macrófago infectado, observado al microscopio de epifluorescencia. Resultados. El 13% de formas metacíclicas para Leishmania (V.) braziliensis correspondió al día 17,5 posinoculación y para Leishmania (V.) peruviana un porcentaje de 9,5% en el día 14,5. No se encontró diferencia significativa entre la capacidad infectiva de los promastigotes en fase estacionaria de ambas especies. Conclusiones. Se recomienda evaluar la capacidad infectiva de los promastigotes metacíclicos de cepas de Leishmania (V.) peruviana y Leishmania (V.) braziliensis en líneas celulares, a fin de determinar el modelo de infección in vitro más adecuado, que permita efectuar estudios de susceptibilidad a las drogas leishmanicidas de mayor eficacia para el control de la enfermedad. Palabras clave: Leishmaniasis; Virulencia; Línea celular, Leishmania braziliensis (fuente: DeCS BIREME). INFECTIVITY OF PROMASTIGOTES IN STATIONARY PHASE OF Leishmania (Viannia) braziliensis AND Leishmania (Viannia) peruviana, IN CELL LINE DH82 ABSTRACTObjectives. To determine the infectivity of promastigotes of Leishmania (V.) peruviana and Leishmania (V.) braziliensis in monocyte-macrophage cell line DH82 of Canis familiaris. Materials and methods. Was conducted a experimental study during the months of january to december 2013. Were used strains of Leishmania were used (V.) braziliensis MHOM / PE / 84 / LC53 and Leishmania (V.) peruviana MHOM / PE / 84 / LC26. The cell line was infected with stationary phase promastigotes and infectivity was determined as the product of percent infected macrophages average amastigotes per macrophage observed in epifluorescence microscope. Results. 13% of metacyclic forms to Leishmania (V.) braziliensis corresponded to 17.5 days post inoculation and Leishmania (V.) peruviana a percentage of 9.5% on the day 14.5. No significant difference was found between infectivity of stationary phase promastigotes of both species. Conclusions. It is recommended assess the infectivity of metacyclic promastigotes peruviana strains of Leishmania (V.) and Leishmania (V.) braziliensis cell lines in order to determine the most appropriate model in vitro infection, allowing leishmanicidas make the drug more effective susceptibility studies for disease control.

Objetivos: Evaluar la actividad fotodinámica in vitro de la ftalocianina de aluminio tetrasulfonada clorada (AlPcClS4) sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania (Viannia) peruviana y Leishmania (Viannia) braziliensis. Materiales y métodos: La actividad del tratamiento fotodinámico empleando AlPcClS4 sobre promastigotes y amastigotes de Leishmania fue determinada mediante el método colorimétrico Metil Tiazol Tetrazolium (MTT) y PCR cuantitativo, respectivamente. Resultados: El tratamiento fotodinámico presentó un efecto inhibitorio sobre promastigotes, principalmente sobre Leishmania (V.) peruviana, en menor proporción sobre Leishmania (V.) braziliensis y sobre las formas intracelulares de ambas especies. En Leishmania (V.) peruviana, a las 24 horas posirradiación a 200 µM y 350 µM el efecto inhibitorio fue del 72,9% y 73,9%, respectivamente y a las 96 horas fue del 78,8% y 80,6%, respectivamente. En las formas intracelulares, empleando 200 µM y evaluado a las 72 horas postratamiento, se observó una inhibición del 57,8% de amastigotes de Leishmania (V.) peruviana. El IC50 fue del 56,5; 50; 44; y 39,7 µM, que corresponde a las 24, 48, 72 y 96 horas posirradiación, respectivamente. Conclusiones: El tratamiento fotodinámico empleando AlPcClS4 frente a las especies de Leishmania presentó resultados alentadores principalmente sobre Leishmania (V.) peruviana, lo cual sugiere su potencial uso como alternativa o complemento del tratamiento convencional de la leishmaniasis tegumentaria. Sin embargo, aún se requiere continuar con nuevos ensayos para determinar el índice de selectividad sobre el parásito en su forma intracelular, y desarrollar estrategias que faciliten el ingreso eficiente de la molécula hacia la célula hospedera y al parásito.