O objetivo do estudo foi comparar a composição físico-química do leite in natura de vacas mestiças em diferentes níveis de produção e a influência da ordem de parição e o estádio de lactação na composição química do leite de vacas de alta produção. A pesquisa foi realizada no município de Rio Verde no sudoeste do estado de Goiás. Foram coletadas 784 amostras de leite in natura de vacas mestiças no experimento I que foram divididas em três níveis de produção. No segundo procedimento experimental, as amostras coletadas resultaram em 657 amostras de leite in natura, sendo divididas em 4 fases do estádio de lactação das vacas e divididas em oito ordens de parição, no qual novilhas de primeira cria correspondiam a 1ª ordem e vacas multíparas a partir da 2ª cria até a oitava. Para análise de variância e comparação de média utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado e o teste de Tukey a 5% de significância utilizando o software SISVAR. Os diferentes níveis de produção resultaram em diferenças físico-químicas dos componentes do leite, portanto, os percentuais encontrados podem não só estar relacionados com o nível, mas também ao estádio de lactação e ordem de parição do animal.