Trypan Blue (TB) and Brilliant Cresyl Blue (BCB) are used to select and determine viability and competence of oocytes, however, the effects of corpora lutea on cumulus expansion during in vitro maturation are still undetermined. Cumulus-oocytes complexes (COCs) from ovaries with ipsilateral (ICL), contralateral (CCL) and without corpora lutea in either ovary (OCL) were selected by visual examination, TB and BCB staining, and matured in vitro to evaluate cumulus expansion. The overall percentage of visually selected COCs was similar in ICL, CCL and OCL (P > 0.05). Proportions of live and mature COCs were similar in all groups (P > 0.05). The overall percentage of BCB+ COCs was 70.1%. BCB+ ICL COCs had less cumulus expansion (60.5%) than BCB+ CCL and OCL COCs (75.7 and 71.4%, respectively; P < 0.01). BCB− ICL COCs had less cumulus expansion (20.0%) than BCB− CCL and OCL (39.7 and 46.1%; P < 0.01). BCB+ CCL and OCL COCs showed the highest cumulus expansion index (P < 0.01). Presence of corpus luteum in the ovary affects negatively cumulus cells expansion. TB and BCB staining facilitate the selection of oocytes with higher degrees of cumulus expansion.

No abstract

Se evaluó la calidad y capacidad fecundante in vitro(FIV) de semen de un banco de bovinos Criollo Uruguayo. Semen de 8 toros, diluido en Triladyl® (T) y Andromed® (A) (con/sin yema de huevo), se evaluó por CASA: concentración, motilidad, cinética, morfología y test hiposmótico. Alas 2 horas se repitió motilidad ycinética. Se aplicó el test­ T para tiempo y diluyentes y percentiles para categorizar los 16 grupos. Cuatrocientos cuatro complejos ovocito ­células del cúmulo (COC) de calidad A, obtenidos de un frigorífico, fueron madurados en TCMcon 5 % de suero fetal bovino (SFB) y hormonas, en gotas, cubiertas con aceite mineral a 38.5 ºC, 5 %CO2 y humedad saturada; tras 22h se inseminaron con semen de 4 toros diluidos en A y T, seleccionado por centrifugación en gradientes de Percoll® (90/45 %), en Talp ­Sperm. Se formaron gotas con Talp­ Fert con 2x106spz/ml y se coincubaron con los COC por 18h. Los presuntos cigotos se denudaron y cultivaron en CR1aa con SFB (5 %). Se evaluó clivaje (48h) y desarrollo embrionario (DE) al día 7. Los resultados de la FIV se analizaron mediante Chi­ cuadrado. No hubo diferencias significativas en el clivaje (A:143/207; T:128/197) ni en el DE (33.33 y 34.52 % respectivamente) entre diluyentes. No hubo diferencias significativas enclivaje entre el semen del toro 1026 (73/109) y 9701 (68/101), ni entre ellos respecto a los toros 5834 (77/102) y 3733 (53/92), el 5834 tuvo mayor clivaje respecto al 3733 (p=0.008). No hubo diferencias significativas en DE entre toros. Salvo el toro 0850 (A y T), los demás resultaron aceptables y fueron fértiles en la prueba in vitro. Este trabajo estudió la calidad del semen del banco y su capacidad fertilizantein vitro, resultando adecuados ambos diluyentes. Salvo las muestras de semen deun toro, el resto podrían ser usadas para inseminación artificial u otras biotecnologías.

RESUMEN:El objetivo del presente trabajo fue estudiar las características morfológicas de los ovarios y ovocitos de la nutria (Myocastor coypus, coypu) en las diferentes estaciones del año y etapas del ciclo estral. La nutria (MC) es un roedor autóctono de Sudamérica, muy utilizado en la industria peletera. Se sacrificaron 20 hembras, de un peso promedio de 4996,2 g recogiéndose muestras vaginales para realizar colpocitología y determinar el momento del ciclo estral, 11 se faenaron en invierno de las cuales 7 estaban en anestro, 1 en proestro y 3 en diestro y 9 en verano, encontrándose 1 en anestro, 1 en proestro y 7 en diestro. Cada ovario fue transportado en una solución de cloruro de sodio isotónico estéril a 37ºC al laboratorio. Los ovarios fueron pesados y medidos y se desmenuzaron en placas de Petri con 2 agujas nº28, bajo microscopio estereoscópico. Se identificaron los ovocitos, se lavaron en solución Buffer Fosfato Salino (PBS) y se caracterizaron en A, B y C. Los resultados de las medias y desviación típica de los pesos de los ovarios fueron: 0,304 g (0,062); largo 9,05 mm (0,19) y ancho 5,05 mm (0,69). Se realizó el análisis de varianza para la condición de los ovocitos, y no se constató diferencias estadísticamente significativas asociadas a la estación ni a la condición estral sobre la condición de los ovocitos (p<0,05). En lo que respecta al número de cuerpos lúteos, se realizó el test de Fisher, y se observaron diferencias significativas entre las etapas del ciclo estral (diestro versus anestro) con una F=20,57 (p=0,0001), entre las estaciones del año (verano versus invierno) con una F=72,21 (p=0,0000) y la interacción entre las etapas y las estaciones con una F=10,29 (p=0,0018).

Morphol., 35(4):1337Morphol., 35(4): -1341Morphol., 35(4): , 2017. RESUMEN:El objetivo fue comparar la tasa de división (TD) y desarrollo embrionario (DE) con semen sexado X (SX) en FIV capacitado con Percoll vs. BO, y evaluar el efecto de dos concentraciones (5x10 6 vs. 10x10 6 espermatozoides/ml), capacitado con BO, comparado con el semen no-sexado (NS). Un avance importante es predeterminar el sexo en bovinos, es posible obtener mayor proporción de terneras a partir del citómetro de flujo con la capacidad de seleccionar los espermatozoides X por la diferencia del ADN (4 %, bovinos), con confiabilidad del 90 %. El SX aumenta la eficiencia reproductiva, permite la selección de hembras e incrementa la ganancia genética. Se obtuvieron complejos ovocito cúmulus (COC), de ovarios de matadero, se cultivaron para maduración en gotas de 100 µl de TCM-199 + 5 % de suero fetal bovino + 0.005 U/ml de (FSH-p) + 10 IU hCG/ml + 1µg Estradiol (E2)/ml, 15 COC/gota, cubiertas con aceite mineral, en incubadora (38,5 ºC, 5 % de CO 2 y 95 % de humedad), 22 h. Posmaduración se dividieron en 4 grupos (G1, G2, G3, G4) y se realizaron dos experimentos simultáneamente: I) G1: NS a 5x10 6 , G2: SX a 5x10 6 , G3: SX a 10x10 6 espermatozoides/ml capacitados con BO. II) G2: SX a 4,5x106 espermatozoides/ml capacitados con BO y G4: SX capacitado con Percoll a 5x10 6 espermatozoides/ ml. Se colocaron 15 COC/gota de semen cubiertas con aceite mineral, en incubadora, 18 h. Para el desarrollo se colocaron en gotas de CR1aa, en incubadora. Se aplicó el test de χ 2 . La TD a las 48 h entre G1 y G3 no presentó diferencias significativas (p<0,05), sin embargo, en ambos grupos fue significativamente mayor al G2. En el DE al día 7 hubo diferencias significativas (p<0,05) a favor del G4. Se obtuvo mayor DE con el SX capacitado con Percoll respecto al BO y no hubo diferencias entre ambas concentraciones de semen.PALABRAS CLAVE: Semen sexado; Fertilización in vitro; Bovinos; Embriones. INTRODUCCIÓNEn vaquillonas lecheras el rango de preñez por inseminación artificial (IA) es del 67 % aproximadamente, siendo la relación entre los sexos machos y hembras 50/50. Es de gran importancia lograr predeterminar el sexo de las crías ya que en la cría para leche son de valor las hembras y muy poco valor los machos. Se hicieron muchos intentos en este sentido que no fueron aplicables. La obtención de mayor número de terneras en proporción significativa respecto a los machos se hizo posible a partir de la creación del citómetro de flujo con capacidad de seleccionar los espermatozoides X e Y por la diferencia del ADN (aproximadamente 4 % en bovinos), con una confiabilidad del 90 % (Xu et al., 2009). Es el único método validado para la selección del sexo precoz actualmente (de Graaf et al., 2009).Esta tecnología solo se ha desarrollado en el uso comercial en la especie bovina. El uso de semen sexado aumenta la eficiencia reproductiva, permite la selección de hembras superiores para reposición, posibilitando un incremento de la ganancia genética (Weigel, 2004;Mocé et a...