The development of DNA-vaccine against classical swine fever

Abstract

The development of a DNA-vaccine against classical swine fever (CSF) is a perspective direction, because it gives an opportunity to develop a marker vaccine due to use of a part of protective antigen molecule, and to induce effectively both cellular and humoral immune response. In this study a recombinant plasmid, containing the fragment of E2 gene of CFS virus (CSFV) in eukaryotic expression vector, has been developed. It has been demonstrated that the fragment of E2 protein of CSFV is expressed in CHO-K1 cells from the developed recombinant plasmid pTR-BKneo -, and we suggest that the protein possesses the post-translational modifications. The data obtained are in favor of the created model DNA-vaccine able to induce humoral immune response to fragment of E2 protein of CSFV.

Inverted terminal repeats from adeno-associated virus-2 enhance the expression of the chimeric E2 glycoprotein gene of classical swine fever virus

“…The advantages of DNA vaccines include their ability to induce both humoral and cellular immune responses, relatively low cost of manufacturing, temperature stability, and the possibility of rapid modification of the initial constructs [3]. Previously, we described the candidate marker DNA-vaccine against CSF based on the fragment of a gene of E2 glycoprotein of CSFV, in eukaryotic expression cassette, placed between inverted terminal repeats (ITRs) from human adeno-associated virus-2 (AAV-2) [4]. We also demonstrated that the immunization of mice with constructed recombinant vector elicited humoral immune response to chimeric E2 protein.…”

Influence of introduction of interleukin-2 and interleukin-12 into experimental marker DNA-vaccine

“…Для посилення імунної відповіді на експериментальну марковану ДНК-вакцину проти класичної чуми свиней (КЧС) -інфекційного захворювання, внесеного до переліку особливо небезпечних захворювань Міжнародного епізоотичного бюро, -про створення якої повідомлялося раніше [3], ми використали гени двох цитокінів -інтерлейкіну-2 та інтерлейкіну-12. Інтерлейкін-2 (ІЛ-2), який продукується активованими CD4 + Т-клітинами, є одним із ключових факторів, які впливають на ріст та активацію цитотоксичних Т-лімфоцитів, В-лімфоцитів макрофагів та клітин природних кілерів [4,5].…”

“…Матеріали і методи У роботі були використані такі плазміди: pTR-BKneoта pBG-TR/01 (створені нами раніше [3,15]), pTR-UFneo-(створена Топоровою О. К. (неопубліковані дані)); pGT60mIL2 та pGT60mIL12 (Invivogene, США), pEGFP-N2, pEGFP-C1 (ClonTech, США), pET24-EGFP.…”

“…Клітини лінії HEK293 культивувалися на поживному середовищі DMEM, яке містило 10 % ембріональної телячої сироватки, 100 U/мл пеніциліну та 100 µг/мл стрептоміцину. Трансфекцію здійснювали хімічним методом із використанням проліетиленіміну у розгалуженій формі з молекулярною вагою 25 кДа, як описано в [3].…”

“…Кров для одержання сироватки відбирали ретроорбітальною пункцією. Визначення титру IgG, специфічних до β-галактозидази E. coli та фрагменту Е2 глікопротеїну ВКЧС у сироватках крові мишей проводили за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу, як описано у [3,15]. Для оцінки значущості різниці показників використовували непараметричний критерій Манн-Уітні (U).…”