Untersuchungen über Coffein und Theobromin bei Schafen: I. Mitteilung Beitrag zur remissionsspektralphotometrischen Bestimmung von Methylxanthinen im biologischen Material

Abstract

Zusammenfassung Die Dünnschichtchromatographie, unter Einbeziehung der Remissionsmessung im UV‐Licht zur quantitativen Auswertung, ermöglicht die Bestimmung von Methylxanthinen und methylierter Harnsäure aus biologischen Proben (Blut, Urin, Pansensaft, Kot). Die untere Nachweisgrenze liegt je nach Untersuchungsmaterial im Bereich von 0,1–0,2 ppm. Aus Blut und Urin werden die Methylxanthine durch reversible Adsorption auf Sephadex gewonnen, wobei eine Änderung des üblichen Elutionspuffers, pH 7 auf pH 9, eine Verringerung des Elutionsvolumens ermöglicht. In Kot, Pansensaft und Gewebe wird eine Abtrennung von Begleitstoffen mittels Extraktion erreicht. In Vergleichsversuchen zur Stabilität der Xanthine (in vitro) mit Urinproben kommt es in Schafurin bei pH 9 zu einer oxidativen Umwandlung des 7‐Methylxanthins in 7‐Methylharnsäure. Ursächlich wird eine bakterielle Umsetzung diskutiert, deren Ausmaß pH‐abhängig zu sein scheint. Dieser Oxidationsprozeß läßt sich durch Zugabe von Thymol oder Ansäuern der Urinproben unterbinden. Von Bedeutung für die Methylxanthin‐Analytik ist hier sowohl die Anwendung von alkalischen Elutionsmitteln, pH 9, als auch die Unterbindung des Oxidationsprozesses im Schafurin durch Thymolzugabe oder Ansäuern. Summary Studies on caffeine and theobromine in sheep Part I: Studies on remission spectrophotometric estimation of methylxanthines in biological materials The quantitative estimation of methylxanthine and methylated uric acid in biological products (blood, urine, ruminal fluid and faeces) was recorded by thin layer chromatography using remission measurement in UV‐light. The lowest estimated level depended on the material examined and ranged from 0.1 to 0.2 ppm. The methylxanthine was obtained from blood and urine by reversible adsorption on sephadex whereby a change of the pH of the elution buffer from 7 to 9 reduces the elution volume. Purification of faeces, ruminal fluid and tissues was undertaken by extraction. Comparative studies on the stability of xanthines (in vitro) in urine samples revealed the oxidation of 7‐methylxanthine to 7‐methyluric acid in sheep urine at pH 9 as a result of the effect of bacterial contaminants. This oxidation process was inhibited by addition of thymol and acidification of the urine. For the analysis of methylxanthines an alkaline elution buffer (pH 9) is therefore used and the oxidation process is inhibited by the addition of thymol or acidification. Résumé Recherches concernant la caféine et la théobromine chez des moutons Communication I: Recherches concernant la détermination spectrophotométrique de rémission des méthylxanthines en matière biologique La chromatographie sur couche mince avec incorporation de la mesure de remission en lumière UV pour une mesure quantitative, rend possible la determination des methylxanthines et de l'acide urique méthylisé à partir d'échantillons biologiques (sang, urine, jus de la panse, matières fécales). La limite inférieure de mise en evidence se situe selon le matériel examiné dans la marge de 0,1–0,2 ppm. Les méth...