Obtenção de protoplastos do fungo filamentoso Aspergillus ochraceus

Almeida, Ana Paula Morais Martins; Dias, Eustáquio Souza; Pereira, Ricardo Tadeu Galvão; Toledo, Rômulo César Clemente; Pfenning, Ludwig H.

doi:10.1590/s0103-84782008000500043

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“…However, there was increased protoplast release at 4 h of incubation and the yields were 1.53 x 10 6 and 1.15 x 10 6 protoplast ml -1 for the respective stabilizers. Similar results were obtained in Penicillium expansum, Penicillium griseoroseum (Dias et al, 1997) and Aspergillus ochraceus (Almeida et al, 2008).…”

Section: Resultssupporting

confidence: 84%

Factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum

et al. 2010

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The present work reports factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum. The usefulness of protoplast isolation is relevant for many different applications and has been principally used in procedures involving genetic manipulation. Osmotic stabilizers, lytic enzymes, incubation time and mycelial age were evaluated in terms of their effects on protoplast yield. The optimal condition for protoplast production included the incubation of young mycelia (48 h) in 0.6 mol l -1 NaCl as the osmotic stabilizer, with 30 mg ml -1 Lysing Enzymes from Trichoderma harzianum for 3 h of incubation. In these conditions protoplasts production was higher than 10 6 protoplatos ml -1 in the digestion mixture, number suitable enough for experiments of transformation in fungi. Sucrose concentrations of 1.2 mol l -1 and 1 mol l -1 were the most suitable osmotic stabilizers for the regeneration after 48 h, with rates of 16.35% and 14.54%, respectively. This study produced an efficient method for protoplast production and reverted them into a typical mycelial morphology using a Colletotrichum lindemuthianum LV115 isolate.Index terms: Protoplast formation, lytic enzyme, anthracnose, osmotic stabilizer, filamentous fungi. RESUMOO presente trabalho apresenta os fatores que afetam a produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum lindemuthianum. O isolamento de protoplastos é muito relevante para diferentes aplicações, principalmente, em procedimentos que envolvem a manipulação genética. Estabilizadores osmóticos, enzimas líticas, tempo de incubação e idade micelial foram testados com relação ao efeito na liberação de protoplastos. As condições otimizadas para produção de protoplastos foram incubação de micélio jovem (48 h) em estabilizador osmótico NaCl 0.6 mol l -1 , acrescido de 30 mg ml -1 da enzima Lysing Enzymes de Trichoderma harzianum incubado, durante 3 h. Nessas condições, a obtenção de protoplastos foi maior que 10 6 protoplatos ml -1 na mistura de digestão, número suficientemente adequado para experimentos de transformação em fungos. Sacarose nas concentrações de 1.2 mol l -1 e 1 mol l -1 foram os estabilizadores mais apropriados para a regeneração, após 48 h, sendo as taxas de regeneração de 16.35% e 14.54%, respectivamente. Este estudo produziu um método eficiente para produção e reversão de protoplastos à morfologia micelial típica de Colletotrichum lindemuthianum utilizando o isolado LV115.Termos para indexação: Formação de protoplastos, enzima lítica, antracnose, estabilizador osmótico, fungo filamentoso.

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Section: Resultssupporting

confidence: 84%

Factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum

et al. 2010

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“…Os fungos de armazenamento estão presentes nas sementes recém-colhidas, geralmente em porcentagens baixas e são capazes de sobreviver em ambiente com baixa umidade, proliferando em sucessão aos fungos de campo causando a deterioração das sementes além de produzirem micotoxinas que causam intoxicações em humanos e animais (MILLER, 1995;NAKAGAWA, 2000). Uma das mais importantes micotoxinas é a ocratoxina A, produzida por vários fungos contaminantes, dentre deles destaca-se o fungo Aspergillus ochraceus (BATISTA et al;2003;SUÁREZ-QUIROZ et al, 2004;ALMEIDA et al, 2008).…”

Section: Introductionunclassified

Danos causados por diferentes potenciais de inóculo de Aspergillus ochraceus no vigor de sementes de soja

et al. 2014

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ResumoA incidência e a severidade de Aspergillus ochraceus pode reduzir a qualidade fisiológica das sementes. Neste trabalho, objetivou-se estudar a qualidade fisiológica de sementes de soja naturalmente infectadas com A. ochraceus. Sementes de soja cv. Conquista com diferentes níveis de inóculo de A. ochraceus foram obtidas por meio da técnica de restrição hídrica e separadas em três níveis (N0, N1 e N2) de acordo com a área superfícial coberta com estruturas fúngicas. Para compor as testemunhas foram retiradas do tratamento N0 duas amostras de 200 sementes de soja, sendo a primeira tratada com os fungicidas carboxin + thiram e a segunda amostra submetida à desinfestação superficial por imersão em solução de hipoclorito de sódio. A seguir, avaliou-se o vigor das sementes por meio do teste de emergência em bandejas e pelo teste de tetrazólio. As avaliações do comprimento de plântulas, massa fresca e massa seca da parte aérea e da raiz foram realizadas aos 21 dias após a semeadura. Observou-se redução do índice de velocidade de emergência e da emergência de plântulas com níveis de até 50% de inóculo em comparação ao tratamento com fungicida. O comprimento das plântulas (44%), a massa fresca da parte aérea e da raiz (82%), a massa seca da parte aérea (81%) e a massa seca da raiz (76%) também foram reduzidos. Sementes de soja com incidência acima de 50% de A. ochraceus apresentaram perda total do vigor e deterioração dos tecidos. Palavras-chave: Deterioração de semente, fungos de armazenamento, Glycine max AbstractThe incidence and severity of Aspergillus ochraceus can reduce seed quality. In this study, we aimed to study the physiological quality of soybean seeds naturally infected with A. ochraceus. Seeds of soybean cv. Conquest with different levels of inoculum of A. ochraceus were obtained by the technique of water and separated into three classes (N0, N1 and N2) according to the constraint surface area covered with fungal structures. The control samples were taken from the N0 treatment, two samples of 200 soybean seeds, the first being treated with fungicides carboxin + thiram and the second sample subjected to surface disinfestation by immersion in a solution of sodium hypochlorite. Next, we assessed the vigour of seeds through the emergency test in trays and the tetrazolium test. The length, seedling fresh and dry weight of shoot and root were evaluated at 21 days after sowing. There was a reduction in the rate

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“…Stable protoplasts in sufficient quantity for transformation were obtained, observing that there are several influencing factors in obtaining it, for example, the enzymatic preparation, the osmotic stabilizer, the age of mycelium, and the microorganism to be used (Almeida et al, 2008;Ishikawa et al, 2010). Even for S. macrospora, which was the first attempt to produce protoplasts, the quantities were favorable, ranging between 30-45 x 10 5 protoplasts/mL, and to S. maydis, of 40-45 x 10 5 protoplast/mL.…”

Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

Colonization of maize seeds by two species of Stenocarpella transformed with fluorescent proteins and assessed through scanning electron microscopy

Siqueira¹,

Machado²,

Corrêa³

et al. 2014

J. Seed Sci.

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-Stenocarpella maydis and Stenocarpella macrospora species causing leaf spots and stem and ear rots, can be transported and disseminated between cultivating areas through seeds. The objective was to transform isolates of species of Stenocarpella with GFP and DsRed and to correlate different inoculum potentials with the effect caused by the presence of these pathogens in the tissues of maize seeds. The isolates were transformed with introduction of the genes in their nuclei, employing the technique of protoplast transformation. Seeds were inoculated by osmotic conditioning method with transformed and not transformed isolates, with different periods of exposition of seeds to those isolates, characterizing the inoculum potentials, P1 (24 h), P2 (48 h), P3 (72 h) and P4 (96 h). The seeds inoculated with isolates expressing GFP and DsRed in both species elucidated by means of the intensities of the emitted fluorescence, the ability of those organisms to cause infection and colonization in different inoculum potentials. The potentials P3 and P4 caused the highest levels of emitted fluorescence for the colonization by both pathogens. A comprehensive and abundant mycelial growth in the colonized seed structures were well visualized at potential P3 and P4 by means of SEM.Index terms: seed pathology, genetic transformation, GFP, DsRed protein, fungus.Colonização de sementes de milho por duas espécies de Stenocarpella transformados com proteínas fluorescentes e avaliadas por microscopia eletrônica de varredura RESUMO -Stenocarpella maydis e Stenocarpella macrospora, espécies causadoras de manchas foliares, podridões em plantas e grãos ardidos de milho, podem ser transportadas e dispersas para áreas produtoras através das sementes. O objetivo foi transformar isolados de espécies de Stenocarpella com GFP e DsRed e correlacionar diferentes potenciais de inóculo com o efeito causado pela presença desses patógenos nos tecidos de sementes de milho. Os isolados foram transformados por meio da introdução dos genes nos seus núcleos, empregando a técnica de transformação de protoplastos. Sementes foram inoculadas pelo método de condicionamento osmótico com isolados transformados e não transformados, com diferentes tempos de exposição das sementes a estes isolados, caracterizando os potenciais de inóculo, P1 (24 h), P2 (48 h), P3 (72 h) e P4 (96 h). As sementes inoculadas, com isolados transformados expressando GFP e DsRed, de ambas as espécies, elucidaram por meio das intensidades das fluorescências emitidas, a capacidade desses organismos de causarem infecção e colonização em diferentes potenciais de inóculo, tendo P3 e P4, provocado as maiores intensidades de fluorescência pelas colonizações dos patógenos. Um abrangente e abundante crescimento micelial nas estruturas colonizadas das sementes foi observado nos potenciais P3 e P4, por meio da MEV.Termos para indexação: patologia de sementes, transformação genética, proteína GFP, proteína DsRed, fungo.1

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Obtenção de protoplastos do fungo filamentoso Aspergillus ochraceus

Abstract: RESUMO

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Factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum

Factors affecting the production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum lindemuthianum

Danos causados por diferentes potenciais de inóculo de Aspergillus ochraceus no vigor de sementes de soja

Colonization of maize seeds by two species of Stenocarpella transformed with fluorescent proteins and assessed through scanning electron microscopy

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